一种提高烟叶中硒含量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113940247A(43)申请公布日2022.01.18(21)申请号202111390597.1A01H5/10(2018.01)(22)申请日2021.11.23A01H6/82(2018.01)(71)申请人河南农业大学地址450002河南省郑州市金水区文化路95号(72)发明人韩丹景艺卓贾玮许自成贾宏昉黄五星邵惠芳肖瑶(74)专利代理机构北京达友众邦知识产权代理事务所(普通合伙)11904代理人徐银辉(51)Int.Cl.A01G22/45(2018.01)A01G31/00(2018.01)C12N15/29(2006.01)C12N15/82(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图4页(54)发明名称一种提高烟叶中硒含量的方法(57)摘要本发明公开了一种提高烟叶中硒含量的方法，属于烟草种植技术领域，其步骤为：将构建的NtWRKY70过表达转基因烟草种子消毒，在铺设海绵的育苗盘中点种，培养至烟苗至四叶期后移植至装有蛭石的培养盒中培养，选取长势一致的烟苗移栽至水培盒中，加入霍格兰氏液、母液和亚硒酸钠的混合液继续培养。本发明利用种植NtWRKY70过表达转基因型烤烟，再结合施加适量浓度的硒来提高烟株对硒元素的利用效率，进而促进烤烟的生长发育，最终达到增加烟叶产量和品质的效果，无需外源施硒，操作简便，人力物力消耗少，效果好，可被大范围推广使用，经本发明创制的NtWRKY70过表达转基因烟草材料，烟叶内在化学成分指标更加协调，品质有所提升。CN113940247ACN113940247A权利要求书1/1页1.一种提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：a)将NtWRKY70过表达转基因烟草种子消毒备用；b)将消毒后的烟草种子在铺设海绵的育苗盘中点种，培养至烟苗至四叶期后移植至装有蛭石的培养盒中培养至十字期；c)选取长势一致的烟苗移栽至水培盒中，加入霍格兰氏液和亚硒酸钠的混合液继续培养至第14d。2.根据权利要求1所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，步骤a)中所述消毒的操作为先加以95％的酒精浸泡消毒，30s后用去离子水冲洗2‑3次，之后用浓度为2％的次氯酸浸泡消毒，10min后用去离子水反复冲洗5‑6次。3.根据权利要求1所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，步骤b)中所述育苗盘中的营养液为霍格兰氏液；所述培养盒中的营养液为霍格兰氏液。4.根据权利要求1所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，步骤b)中所述点种后的培养条件：种子萌发后换成1/4的霍格兰氏液，一周后换成1/2的霍格兰氏液直至移栽到水培盒中；所述步骤c)的培养条件为：光周期14h，昼温28±2℃，光强4000lx；夜温18±2℃，相对湿度65％‑70％。5.根据权利要求1所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，所述混合液中每1L霍格兰氏液由5ml母液稀释得到；所述亚硒酸钠的加入量为加入至混合液中亚硒酸钠浓度至25μmol/L。6.根据权利要求5所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，所述母液每1L中含有如下组分：A液①：KNO350.555g，A液②：Ca(NO3)2·4H2O118.075g，B液：MgSO4·7H2O49.294g、KH2PO413.609g，C液：H3BO32.782g、MnCl2·4H2O1.979g、ZnSO4·7H2O0.230g、CuSO4·5H2O0.075g、Na2MoO4·2H2O0.097g，铁盐：FeSO4·7H2O5.561g、EDTA‑Na27.485g。7.根据权利要求5所述提高烟叶中硒含量的方法，其特征在于，所述霍格兰氏液的原料如下：KNO310ml，Ca(NO3)2·4H2O10ml，MgSO4·7H2O、KH2PO4的混合液10ml，H3BO3、MnCl2·4H2O、ZnSO4·7H2O、CuSO4·5H2O、Na2MoO4·2H2O的混合液1ml，FeSO4·7H2O、EDTA‑Na2的混合液1ml。2CN113940247A说明书1/4页一种提高烟叶中硒含量的方法技术领域[0001]本发明涉及一种提高烟叶中硒含量的方法，属于烟草种植技术领域。背景技术[0002]微量元素硒(Se)是人体14种必须的微量营养元素之一，不仅在预防疾病、抗击癌症、缓解提高人体免疫力等方面发挥重要作用，同时也是植物生长发育的有益元素，在促进植物生长、改善品质、增加产量等方面发挥着重要生物学效应。植物可以通过不同程度的对环境中的硒吸收、利用、转化，将不同形态的硒转化为硒蛋白等有机硒。[0003]烟草生物量大，对硒有较强富集能力，是一种特殊经济作物。大量研究表明，使用富硒烟叶制作的卷烟能够增加香烟硒含量，减低焦油和自由基含量，提高吸烟者