一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114349841A(43)申请公布日2022.04.15(21)申请号202210035256.0(22)申请日2022.01.13(66)本国优先权数据202111246263.72021.10.26CN(71)申请人安徽农业大学地址230036安徽省合肥市蜀山区长江西路130号(72)发明人陈兴勇杜叶叶刘政权(74)专利代理机构合肥中谷知识产权代理事务所(普通合伙)34146代理人杜瑶(51)Int.Cl.C07K14/47(2006.01)C12N15/88(2006.01)C12N5/10(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图3页(54)发明名称一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用(57)摘要本发明公开了一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用，所述转录因子为C/EBPα，用于促进禽类卵巢卵泡OVR基因表达。本发明以卵泡膜表面卵黄前体物受体(OVR)基因启动子区转录因子结合位点为研究对象，通过预测启动子区转录因子结合位点、过表达和敲低以及脂质转运验证启动子区转录因子，最后筛选出调控OVR表达的转录因子，并能促进OVR基因表达。本发明通过探究OVR表达调控的转录因子，以及转录因子应用于OVR高效表达，促进卵泡快速发育，对研究OVR基因启动子区转录调控因子参与卵泡发育促进产蛋等的分子机制具有很好的应用价值。CN114349841ACN114349841A权利要求书1/1页1.一种调控禽类卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子，其特征在于，所述转录因子为C/EBPα，所述C/EBPα通过与0VR基因启动子区转录因子结合位点结合，用于促进禽类卵巢卵泡OVR基因表达。2.一种如权利要求1所述转录因子在调控禽类卵泡膜表面OVR基因表达活性中的应用。3.一种如权利要求1所述转录因子在协同OVR基因转运脂质进入细胞中的应用。4.一种调控禽类卵泡膜表面OVR基因表达活性的方法，其特征在于，构建C/EBPα过表达或敲低载体，导入禽类卵泡膜颗粒细胞中，用以促进或降低禽类卵泡膜表面OVR基因表达活性。5.根据权利要求4所述的一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的方法，其特征在于，所述禽类卵泡膜颗粒细胞为野生型鹅卵泡膜颗粒细胞或导入有OVR表达载体的鹅卵泡膜颗粒细胞。6.根据权利要求5所述的一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的方法，其特征在于，所述鹅卵泡膜颗粒细胞为鹅小黄卵泡细胞。7.一种脂质转运系统，其特征在于，所述系统为包含如权利要求1所述转录因子的过表达载体和OVR基因的禽类卵泡膜颗粒细胞。2CN114349841A说明书1/4页一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用技术领域[0001]本发明涉及属于细胞工程和基因工程技术领域，具体涉及一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用。背景技术[0002]产蛋量作为繁殖性状之一受卵泡发育成熟和排卵影响。卵泡发育成熟卵黄前体物合成与转运调节至关重要。卵黄前体物主要包括极低密度脂蛋白(VLDLy)和卵黄生成素(VTG)。卵黄前体物可通过母禽分泌雌激素刺激肝脏合成释放进入血液循环，转运至卵泡。卵泡快速发育阶段，VLDLy和VTG等营养物质通过卵泡膜表面血管进入卵泡膜颗粒细胞层，与颗粒细胞表面卵黄生成受体(Oocytevitellogenesisreceptor,OVR)结合后，细胞膜内陷封闭形成有被小泡，将其运输到生长中的卵母细胞。随后配体‑受体复合物分离，受体重新回到卵母细胞表面继续下一轮转运。分离后的VLDLy在溶菌酶的作用下降解，供卵母细胞吸收形成卵黄内物质。可见，卵黄发育主要取决于VLDLy进入卵母细胞的数量，即颗粒细胞层表面受体OVR/VLDLR表达量决定了卵黄内物质含量和卵泡发育速度。[0003]产蛋初期受激素水平影响，母禽卵巢胆固醇和脂质合成相关基因CETP、SREBP和Apo‑VLDL2等表达产生变化，但卵泡膜颗粒细胞表面卵黄受体OVR基因表达不受激素调控。卵母细胞卵黄生成受体(OVR/VLDLR)是卵黄前体物进入卵母细胞的特异性受体，是蛋禽繁殖活动中调节卵母细胞正常发育的关键基因，可特异性转运卵黄等主要脂类物质和非脂类蛋白物质等，其基因多态可能影响卵黄内物质含量。利用OVR/VLDLR基因点突变培育了来航鸡限制性产蛋品系，并证实OVR/VLDLR基因突变导致受体与VLDLy及VTG结合效率下降，卵黄发育受阻。[0004]产蛋量作为重要的经济性状，在我国地方品种禽类表现的差异较大，同一品种内不同个体间产蛋整齐性差，严重影响了地方品种家禽的产业化发展。如何有效调控地方品种家禽的产蛋量成为当前的研究热点。从以上分析可以看出，OVR在卵泡膜中的