一种用于水稻光温敏雄性不育基因pms3分子标记的引物及方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114427006A(43)申请公布日2022.05.03(21)申请号202210177997.2(22)申请日2022.02.24(71)申请人湖北省农业科学院粮食作物研究所地址430064湖北省武汉市洪山区南湖大道3号(72)发明人游艾青冯旭鑫刘凯陈俊孝周雷李三和闸雯俊徐华山李培德杨国才陈志军刘凯(74)专利代理机构北京众合诚成知识产权代理有限公司11246代理人刘妮(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表1页附图1页(54)发明名称一种用于水稻光温敏雄性不育基因pms3分子标记的引物及方法(57)摘要本发明公开了一种用于水稻光温敏雄性不育基因pms3分子标记的引物及方法，该引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。本发明的用于水稻光温敏雄性不育基因pms3分子标记，只需要一次常规的PCR和琼脂糖凝胶电泳技术就可起到基因分型的作用，此外该引物只能扩增出一条目的条带，扩增结果一目了然，便于结果的记录，并且在整个操作过程中，操作步骤简单，操作时间短，实验所需的试剂和耗材成本低，加速了实验进程，节约了实验成本，达到了快速、便捷和可靠的分子标记辅助育种的目的。CN114427006ACN114427006A权利要求书1/1页1.一种用于水稻光温敏雄性不育基因pms3分子标记的引物，其特征在于，该引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。2.一种用于水稻光温敏雄性不育基因pms3分子标记的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中的引物为如权利要求1所述的用于水稻光温敏雄性不育基因pms3分子标记的引物。3.如权利要求1所述的用于水稻光温敏雄性不育基因pms3分子标记的引物的应用，其特征在于，该应用为以下任意一种：(1)用于鉴定或筛选具有水稻光温敏雄性不育基因pms3的水稻；(2)用于水稻分子标记辅助育种。4.一种鉴定或筛选具有水稻光温敏雄性不育基因pms3的水稻的方法，其特征在于，该方法包含：以待测水稻的基因组为模板，采用核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2的引物组和核苷酸序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的引物组分别进行PCR扩增；若仅核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2的引物组扩增的PCR产物在280bp有条带，则该待测水稻为pms3纯合基因型；若仅核苷酸序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的引物组扩增的PCR产物在281bp有条带，则该待测水稻为PMS3纯合基因型；若核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2的引物组扩增的PCR产物在280bp有条带，且核苷酸序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的引物组扩增的PCR产物在281bp有条带，则该待测水稻为杂合基因型。2CN114427006A说明书1/4页一种用于水稻光温敏雄性不育基因pms3分子标记的引物及方法技术领域[0001]本发明涉及一种水稻光温敏雄性不育基因分子标记，具体涉及一种用于水稻光温敏雄性不育基因pms3分子标记的引物及方法。背景技术[0002]为提高水稻单产，目前我国杂交稻发展经历了从细胞质雄性不育系遗传为主的三系法到以光温敏雄性不育系遗传为主的两系法这两个重要阶段。其中三系法易受到恢复系和保持系的制约，并且存在育种周期长等问题，不利于水稻的制种的育种。而近年来两系法杂交稻因具有一系两用、配组自由等优点而备受青睐，在杂交稻的培育和推广中占据重要的地位。[0003]随着育种家对光温敏核不育系分子机理的深入研究，一大批两系不育系的基因被逐渐定位克隆出来，如pms3、pms1和tms5等，更好地为分子标记辅助育种奠定了基石。[0004]Pms3基因来源于水稻农垦58S,转录一个1236bp的长链非编RNA(lncRNA)‑LDMAR，在长日照条件下，充足的LDMAR转录量可以满足花粉的正常发育，但由于在第789位点上存在一个C到G的碱基差异，进而使LDMAR的二级结构发生了改变，降低了LDMAR转录量，最终导致花粉不育。[0005]“水稻光温敏核不育基因tms5与pms3的效应初探”(江苏省遗传学会2019年学术研讨会论文集)，根据pms3转录本上的SNP变异，在其突变位点上有一个酶切位点能够被Csp6I识别并切割，继而合成相应的引物进行PCR扩增和酶切。该技术结果不能一步到位需要酶切得到准确的结果，操作较繁琐，实验成本相对较高，且对PCR产物回收的DNA质量要求高，大批量检测花费时间长不利于实验进程。发明内容[0006]本发明的目的是提供一种用于水稻光温敏雄性