一个水稻抗稻瘟病相关基因OsPsbR及其基因工程应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114908105A(43)申请公布日2022.08.16(21)申请号202210621109.1C12N15/84(2006.01)(22)申请日2022.06.02A01H5/00(2018.01)A01H6/46(2018.01)(66)本国优先权数据202210544664.92022.05.19CN(71)申请人南京农业大学地址210095江苏省南京市玄武区卫岗1号(72)发明人鲍永美赵智潘晓倩张红生黄骥王建飞余耀唐海娟董世楠张成成(74)专利代理机构南京天华专利代理有限责任公司32218专利代理师傅婷婷徐冬涛(51)Int.Cl.C12N15/29(2006.01)权利要求书1页说明书5页C07K14/415(2006.01)序列表4页附图3页(54)发明名称一个水稻抗稻瘟病相关基因OsPsbR及其基因工程应用(57)摘要本发明属于基因工程领域，涉及一个水稻稻瘟病抗性相关基因OsPsbR及其在基因工程中的应用。水稻基因OsPsbR编码水稻叶绿体光系统Ⅱ亚基蛋白，该基因的cDNA序列如SEQIDNO.1所示，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。本发明公开了水稻基因OsPsbR，为水稻中首次报道，该基因编码蛋白是通过抗稻瘟病相关SNARE囊泡蛋白OsSYP121酵母文库筛选鉴定得到的，与OsSYP121存在互作。qRT‑PCR表达分析表明OsPsbR受稻瘟病菌接种诱导，并且OsPsbR过表达转基因材料水稻植株的苗瘟抗性增强。因此可利用该基因构建过表达转基因材料，提高植物抗病性，以进行植物品种改良。CN114908105ACN114908105A权利要求书1/1页1.水稻基因OsPsbR，其特征在于编码叶绿体光系统Ⅱ亚基，且cDNA序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述的水稻基因OsPsbR编码的水稻蛋白，其特征在于其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。3.权利要求1所述的水稻基因OsPsbR的过表达载体。4.根据权利要求3所述的过表达载体，其特征在于所述的过表达载体是以水稻品种黑壳子粳的cDNA为模板，扩增水稻基因OsPsbR的CDS序列，连接到pCAMBIA1300s载体上，构建得到1300s‑OsPsbR载体。5.权利要求1所述的水稻基因OsPsbR在通过基因工程手段培育稻瘟病抗性品种中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于通过基因工程手段提高水稻中所述的水稻基因OsPsbR的表达，以提高水稻对稻瘟病的抗性。7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于将权利要求3或4所述的过表达载体转入感稻瘟病水稻品种,以提高感稻瘟病水稻品种对稻瘟病的抗性。8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于包括如下步骤：1)设计引物P9和P10，以黑壳子粳的cDNA为模板，对OsPsbR的CDS序列连带载体接头进行扩增，P9、P10的序列分别为SEQIDNO.11、SEQIDNO.12；2)通过Takara公司的限制性内切酶KpnΙ和SalΙ，对pCAMBIA1300s载体进行酶切，酶切后的载体通过同源重组分别与对应片段连接，转化大肠杆菌感受态DH5α中，用对应抗性的LB培养基进行筛选，获得的阳性单克隆菌落经测序验证后，进行质粒提取，并转入农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导的水稻转基因体系转入感稻瘟病水稻品种苏御糯的愈伤组织中，通过筛选、分化、生根等一系列过程获得过表达材料的植株。9.权利要求3或4所述的水稻基因OsPsbR的过表达载体在通过基因工程手段培育稻瘟病抗性品种中的应用。2CN114908105A说明书1/5页一个水稻抗稻瘟病相关基因OsPsbR及其基因工程应用技术领域[0001]本发明属于基因工程领域，涉及一个水稻的稻瘟病抗性相关基因OsPsbR及其在基因工程中的应用。背景技术[0002]叶绿体是植物光合作用的场所，且与植物免疫反应密切相关，参与合成植物免疫反应的重要信号物质，如激素水杨酸、茉莉酸和脱落酸，以及Ca2+和ROS等次生信使。PsbR(photosystemIIsubunitR)为叶绿体光系统Ⅱ亚基，其作为停泊蛋白，对光系统Ⅱ的正确组装以及光合作用的正常进行具有重要作用。PsbR突变体中光系统Ⅱ的稳定性降低，电子传递速率减慢，非光化学淬灭减少，光合作用受到抑制。但尚未有研究报道PsbR作为抗病相关基因，参与植物的免疫反应。发明内容[0003]本发明的目的在于公开水稻基因OsPsbR。[0004]本发明的另一目的是提供稻瘟病抗性相关基因OsPsbR的基因工程应用。[0005]本发明的目的可通过如下技术方案实现：[0006]水稻编码叶绿体蛋白基因OsPsbR，该基因的cDNA序列如SEQIDNO.1所示。[0007]本发明所述的水稻基因O