一株拮抗足癣病原真菌的短小芽孢杆菌及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115074286A(43)申请公布日2022.09.20(21)申请号202210765575.7C12R1/07(2006.01)(22)申请日2022.07.01(83)生物保藏信息CGMCCNO.246052022.03.28(71)申请人安徽农业大学地址安徽省合肥市长江西路130号(72)发明人刘威康茹雪李耀星杨杰白倩(74)专利代理机构太原华弈知识产权代理事务所14108专利代理师马秦锁(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)A01N63/22(2020.01)A01P3/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图4页(54)发明名称一株拮抗足癣病原真菌的短小芽孢杆菌及其应用(57)摘要本发明公开了一株拮抗足癣病原真菌的菌株X1，属于短小芽孢杆菌（Bacilluspumilus），保藏号CGMCCNO.24605，所述菌株X1可以同时拮抗属于互隔交链孢菌的菌株K1及红色毛癣菌，降低拮抗足癣病原真菌时抗生素的使用量，增加足部洁净度和健康水平。CN115074286ACN115074286A权利要求书1/1页1.一株拮抗足癣病原真菌的短小芽孢杆菌X1，属于短小芽孢杆菌（Bacilluspumilus），保藏号CGMCCNO.24605。2.权利要求1所述短小芽孢杆菌X1的培养方法，其特征是包括如下步骤：将菌株X1接种于液体培养基，于180r/min、28℃的条件下培养。3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征是所述培养基为pH5.8−6.1的YG培养基，包括：酪蛋白、酵母浸粉、半胱氨酸、NaHCO3、K2HPO4、KH2PO4、NaCl、MgSO4·7H2O、CaCl2、葡萄糖、叶酸、生物素、维生素B12、P‑对氨基苯甲酸钾(P‑aminobenzoic)、氯高铁血红素、维生素B6。4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征是每升所述培养基中含有10g酪蛋白，2.5g酵母浸粉，1g半胱氨酸，4gNaHCO3，3gK2HPO4，3gKH2PO4，0.9gNaCl，1gMgSO4·7H2O，1gCaCl2，2.5g葡萄糖，10μL叶酸，10μL生物素，10μL维生素B12，10μLP‑对氨基苯甲酸钾(P‑aminobenzoic)，10μL氯高铁血红素，10μL维生素B6。5.权利要求1所述的短小芽孢杆菌X1作为抑制足癣病原真菌的菌株的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征是所述短小芽孢杆菌X1作为抑制互隔交链孢菌制剂的应用。7.根据权利要求5所述的应用，其特征是所述短小芽孢杆菌X1作为抑制红色毛癣菌制剂的应用。2CN115074286A说明书1/6页一株拮抗足癣病原真菌的短小芽孢杆菌及其应用技术领域[0001]本发明涉及微生物领域，具体涉及一株拮抗足癣病原真菌的短小芽孢杆菌。背景技术[0002]足癣是由真菌感染所引起的一类复发率极高的慢性皮肤性疾病，具有极强的传染性。一般情况下，针对足癣采用外用药品涂抹的方式治疗，但对于顽固足癣，也会给予口服药，此类内服药品可能会给人体带来一些肝毒性等副作用，而外用药品针对孕妇及儿童也是需要谨慎斟酌的。[0003]近年来，足癣研究大多致力于化学药物开发和临床病例统计，极少从微生物组水平上研究足癣的发生发展进程与机制。前人基于微生物培养的研究并未完全展现出足癣相关的微生物群落，仅认为其是红色毛癣菌及其他皮肤表皮癣菌感染。然而，其反复的感染过程提示微生物群落在足癣致病中发挥着一定的作用。目前对于皮肤微生物的调节大致包括抗生素、益生菌和皮肤微生物复合体的移植。前者对于消除致病菌的有益效果是毋庸置疑的，但其长时间的使用必然会增加机体对其产生依赖性的几率，甚至还可能会引起耐药性、抗药性，那这必将会使病原菌的寄生更加猖獗，最终对疾病的治疗缓解丝毫不起作用。且微生物制剂疗法或是利用微生物与宿主间作用关系的替代疗法越来越成为微生物研究领域的热点。发明内容[0004]本发明的目的在于提供一株拮抗足癣病原真菌的短小芽孢杆菌X1及其应用，可以同时拮抗互隔交链孢菌及红色毛癣菌，降低拮抗足癣病原真菌时抗生素的使用量，增加足部洁净度和健康水平。[0005]本发明所述的菌株是从足部样本中分离出的一株可以拮抗足癣病原真菌的短小芽孢杆菌，该菌在YG和PDA培养基上均生长良好，培养24h，形成1‑2mm，圆形、半透明、乳白色，边缘光滑的菌落；继续培养至48h，菌落略增大，大小为2‑3mm，呈圆形、不透明、乳白色，表面出现褶皱，边缘略显不规则。[0006]取短小芽孢杆菌X1的基因组DNA（1440bp），测序。得到结果经BLAST比对后得出菌株X1与短小芽孢杆菌相似度达99.51%，结合菌落、菌体特征及分子生物学特征，确定菌株为短小芽孢