乳铁蛋白在羊精子保存中的应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115067320A(43)申请公布日2022.09.20(21)申请号202210770703.7(22)申请日2022.06.30(71)申请人内蒙古农业大学地址010018内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区昭乌达路306号(72)发明人曹贵方苏杰杨燕燕宋永利李喜和王彩云孙洋李秀男王大清(74)专利代理机构北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司11385专利代理师戴嵩玮(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称乳铁蛋白在羊精子保存中的应用(57)摘要本发明属于动物繁殖技术领域，具体涉及乳铁蛋白在羊精子保存中的应用。本发明通过在羊精子的冷冻保存液中加入乳铁蛋白，可以保持精子的活力与膜完整性，降低精子活性氧水平，提高解冻后精子的存活时间和品质。CN115067320ACN115067320A权利要求书1/1页1.乳铁蛋白在羊精子保存中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述羊精子保存包括羊精子冷冻保存。3.一种精子冷冻保存试剂，其特征在于，所述精子冷冻保存试剂包括乳铁蛋白和辅料。4.根据权利要求3所述的精子冷冻保存试剂，其特征在于，所述辅料包括精子冷冻保存液。5.根据权利要求4所述的精子冷冻保存试剂，其特征在于，所述精子冷冻液包括TrisA溶液和TrisB溶液。6.根据权利要求5所述的精子冷冻保存试剂，其特征在于，所述乳铁蛋白的质量与TrisA溶液的体积和TrisB溶液的体积比为10～20μg：1～2mL：1～2mL。7.根据权利要求3～6任一项所述的精子冷冻保存试剂，其特征在于，所述精子冷冻保存试剂用于哺乳动物精子的保存。8.一种精子冷冻保存的方法，其特征在于，包括如下步骤：将乳铁蛋白分别与TrisA溶液和TrisB溶液混合，得到乳铁蛋白‑TrisA混合溶液和乳铁蛋白‑TrisB混合溶液，所述乳铁蛋白‑TrisA混合溶液中乳铁蛋白的质量与TrisA溶液的体积比为10～20μg：1～2mL，所述乳铁蛋白‑TrisB混合溶液中乳铁蛋白和TrisB溶液的体积比为10～20μg：1～2mL；以乳铁蛋白‑TrisA混合溶液第一稀释鲜精，得到第一稀释精液；平衡后，利用乳铁蛋白‑TrisB混合溶液将平衡得到的平衡精液第二稀释，冷冻保存。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述第一稀释精液中的精子浓度为4.0×107～4.0×108个精子/mL；经过所述第二稀释后的第二稀释精液中的精子浓度为2.0×107～2.0×108个精子/mL。10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述平衡的温度为4～8℃，时间为60～100min。2CN115067320A说明书1/6页乳铁蛋白在羊精子保存中的应用技术领域[0001]本发明属于动物繁殖技术领域，具体涉及乳铁蛋白在羊精子保存中的应用。背景技术[0002]哺乳动物的精液冷冻保存技术早在200年前就出现了，1776年意大利生物学家拉扎罗·斯帕兰扎尼(LazaroSpallanzani)曾经尝试将精子储存在雪中，以低温方式保存精子。但这种冻存方式因低温时细胞内会产生冰晶，而冰晶使得细胞内产生内源性机械损伤，引起细胞内环境渗透压、pH、电解质等的改变，造成细胞致命性损伤而死亡。直到二十世纪中叶，英国生物学家克里斯托弗·波奇(ChristopherPolge)等人在冻存种牛的精子时加入了甘油，为精液冻存带来了新突破。甘油不仅可以提高细胞膜对水的通透性，还能使冰点降低，延缓冻存对精子细胞的损伤作用。另外，缓慢冷冻过程也可使细胞内的水分渗出至细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而降低由于冰晶形成造成的细胞损伤。[0003]养羊业在世界范围内分布大而广，在动物养殖业中占有重要地位，但是同时也存在发展不均衡、产品品质低下不稳定的产业常见问题。因此，利用优良公羊品种提高品种质量，提升良种化程度具有重要意义。为了提高良种化过程中公羊精液的利用率，技术人员多采用冷冻保存技术对公羊的精液进行保存。但常规保存方法存在冷冻后精子活力低，质量差的问题。乳铁蛋白是一种精子结合蛋白，在附睾体和尾部细胞中表达，可能在精子活动的保护和调节中发挥生物学作用，目前尚未有采用乳铁蛋白进行羊精子超低温冷冻的保存方法体系。发明内容[0004]本发明的目的在于提供乳铁蛋白在羊精子保存中的应用，将乳铁蛋白应用于羊精子的保存中，可保持羊精子的活力与膜完整性，提升羊精子的品质。[0005]本发明提供了乳铁蛋白在羊精子保存中的应用。[0006]优选的，所述羊精子保存包括羊精子冷冻保存。[0007]本发明还提供了一种精子冷冻保存试剂，所述精子冷冻保存试剂包括乳铁蛋白和辅料。[0008]优选的，所述辅料包括精子冷冻保存液。[000