山羊毛囊干细胞分离培养方法研究.docx

山羊毛囊干细胞分离培养方法研究山羊毛囊干细胞分离培养方法研究（共9篇），下面是小编整理过的山羊毛囊干细胞分离培养方法研究，欢迎阅读分享，希望对大家有所帮助。篇1：山羊毛囊干细胞分离培养方法研究山羊毛囊干细胞分离培养方法研究分别采用组织块法和酶消化法分离培养山羊毛囊干细胞,并通过形态学观察、免疫组化染色以及克隆形成率来比较2种方法体外分离培养毛囊干细胞的效率.组织块法获得的细胞第1、3、7代K19阳性率分别为52.0%±1.62%、68.4%±1.82%、72.0%±2.42%,mtegrin-β1分别为52.5%±2.12%、66.3%±1.98%、73.0%±2.16%,而消化法获得的`细胞第1、3、7代K19阳性率分别为56.2%±3.12%、61.7%±1.17%、64.0%±3.02%,integrin-β1分别为56.0%±1.12%、63.0%±1.12%、68.0%±2.32%;组织块法获得的细胞第1、3、7代克隆形成率分别为18.4%±0.77%、31.3%±0.88%、44.7%±1.03%,而消化法获得细胞第1、3、7代克隆形成率为22.6%±2.30%、26.9%±0.86%、32.8%±1.05%;在同样培养条件下,组织块法获得的细胞可体外传19代,而消化法可传12代.结果表明两种方法均能分离得到毛囊干细胞并进行传代,但随着传代次数的增加,组织块法获得的细胞免疫组化染色阳性率、克隆形成率以及传代能力均显著高于酶消化法获得的细胞(P＜0.01).作者：史明艳杨学义窦忠英SHIMing-yanYANGXue-yiDouZhong-ying作者单位：西北农林科技大学国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心,杨凌,712100刊名：畜牧兽医学报ISTICPKU英文刊名：ACTAVETERINARIAETZOOTECHNICASINICA年，卷(期)：37(5)分类号：Q813关键词：山羊毛囊干细胞组织块酶消化克隆形成率篇2：分离培养及鉴定骨髓间充质干细胞的方法探析论文分离培养及鉴定骨髓间充质干细胞的方法探析论文骨髓间充质干细胞（BMSCs）也被称为间质祖细胞，由于其巨大的增殖和多向分化潜能，被认为是再生医学、基因治疗和细胞治疗的理想种子来源，已被广泛进行研究[1-3].目前，BMSCs在动物实验和临床应用上取得了巨大的成果，在骨、软骨、肌腱、神经胶质修复、心脏疾病、心肌梗塞、肝脏损伤等方面取得了重大突破[4-6],并且可避免胚胎干细胞和异基因干细胞治疗所涉及的伦理道德和免疫排斥问题，有利于细胞移植。但是骨髓中的BMSCs含量极少，约占骨髓全细胞的0.001%~0.010%[7];因此，需要在体外分离纯化、培养扩增来满足临床应用和实验研究。研究表明，不同分离方法和首次换液方式对BMSCs的增殖培养有很大的影响[8].本试验通过观察2种不同分离方法和不同首次换液时间对兔BMSCs生物活性的影响，旨在建立一种有效的分离培养及鉴定BMSCs的方法，以便获得大量、高纯度、高活性、培养周期短的BMSCs,为下一步研究和临床实验提供基础。1材料与方法1.1实验动物1月龄雄性新西兰大耳白兔1只，由河南省实验动物中心提供。1.2主要试剂和仪器胎牛血清（北京四季青）；DMEM-F12（Gibco）；胰蛋白酶（北京拜尔迪生物公司）；DMSO（Gibco）；红细胞裂解液（北京赛驰生物技术有限公司）；生物素标记山羊抗兔IgG、HRP标记链霉亲和素、DAB显色试剂盒、改良型苏木素（北京华肽先锋）；兔抗兔CD34、CD44、CD99抗体（北京博奥森）；封闭山羊血清（北京博奥森）。HF151UV型CO2培养箱（HealForce）；倒置显微镜（Leica）;800型离心机、85-2恒温磁力搅拌器：金坛市大地自动化仪器厂；数码相机：日本佳能IXUS980IS;电子天平：METTLERTOLEDOAL104;超净工作台：AIRTECH;FX101-2型电热鼓风干燥箱：上海树立仪器仪表有限公司；pH计：上海雷磁仪器厂。1.3BMSCs的提取用陆眠宁（846）将1月龄新西兰大耳白兔麻醉，腿部去毛消毒，无菌条件下分离股骨、胫骨，剔除脂肪和肌肉，PBS液反复冲洗，剪断两侧干骺端，尽量多保留干骺端，DMEM-F12培养液反复冲洗骨髓腔于A、B两个10mL的离心管内，直至骨髓腔发白，1000r/min离心5min,弃上清。1.4全骨髓贴壁法A管用PBS重悬细胞，1000r/min离心5min洗涤2次，弃上清。吸取3mL含10%FBS的DMEM-F12（1∶100双抗）培养液重悬细胞，接种至3个25cm2培养瓶，补足培养液至5mL,轻柔吹打均匀。置于37℃、5%CO2条件下培养。以后每3d换液1次，待细胞生长融合至80%时传代培养。先弃去旧培养液，PBS液浸洗。0