一种解决植物组织培养中茎尖分生组织扁平化的组培方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115088619A(43)申请公布日2022.09.23(21)申请号202210812764.5(22)申请日2022.07.11(71)申请人海南茗卉农林科技发展有限公司地址572541海南省乐东黎族自治县佛罗镇白井村69号(72)发明人景维杰段学武(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11465专利代理师田立媛(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图3页(54)发明名称一种解决植物组织培养中茎尖分生组织扁平化的组培方法(57)摘要本发明公开了一种解决植物组织培养中茎尖分生组织扁平化的组培技术，使已经发生茎尖分生组织扁化的植物材料有效恢复再生能力。技术分为四个阶段包括：抑制发生茎尖分生组织扁平化的植物材料的茎尖分生组织细胞过渡增殖、促茎尖分生组织生长分化为芽、芽体复壮、生根四个过程。主要从调整培养基渗透压、植物生长调节剂、基本培养基不同形态氮元素比例几个方面，综合调控植物材料内源激素，促其趋向需要的平衡，恢复再生能力；将解决植物组织培养中茎尖分生组织扁平化的技术应用于解决植物组织培养中，减少植物组织培养工作中因此所致的损失和对难得珍贵材料的补救，促进现代化农业技术的发展。CN115088619ACN115088619A权利要求书1/2页1.一种解决植物组织培养中茎尖分生组织扁平化的组培方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)抑制发生茎尖分生组织扁平化材料的愈伤组织化：将愈伤组织化的分生组织团块培养体切分成小块，切去下部愈伤组织块丢弃，仅切留表面分生组织薄层接种到培养基I，接种后于培养室温度22±1℃、荧光灯光照900‑1200lux、光照12h/d条件下培养，除湿机控制室内相对湿度70％‑75％；(2)促茎尖分生组织分为生长为芽：培养基I接种后培养30‑45d后，团块表面有突出芽点群，将细密芽点的团块细分切为小块，接种到培养基II，接种后放置在培养室培养观察，培养条件同步骤(1)(3)芽复壮：培养基II接种培养30‑50d后，团块上有明显的凸出的细密芽从，继续将团块分切为1‑3个芽/块接种到培养基III，培养条件同步骤(1)(4)诱导生根，植物再生：培养基II接种后培养30‑50d后，芽明显生长为健壮的无根苗丛，叶片展开。从基部切下接种到生根培养基Ⅳ，培养室内培养，先暗培养4‑5d后光培养，培养室温度控制26‑28℃，光照12h/d，30‑45d后，出瓶移栽。2.如权利要求1所述的一种解决植物组织培养中茎尖分生组织扁平化的组培方法，其特征在于，步骤(1)中所述抑制茎尖分生组织细胞过渡增殖的培养基I包括如下质量浓度的组分：NH4NO30.64g/l、KNO32.41g/l、MgSO4.7H2O0.25g/l、CaCl20.31g/l、KH2PO30.33g/l、盐酸硫胺素10mg/l，盐酸吡哆醇5mg/l，肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、KI0.83mg/l、H3BO36.2mg/l、MnSO4.4H2O22.3mg/l、ZnSO4.7H2O8.6mg/l、Na2MoO4.2H2O0.25mg/l、CuSO4.5H2O0.025mg/l、CoCl2.6H2O10mg/l、FeSO4.7H2O27.8mg/l、Na2‑EDTA37.3mg/l、白砂糖35g/l、IAA0.1mg/l、GA30.1mg/l、腺嘌呤30‑50pm、琼脂6g/l、AVG50ug/lPH：6.0。3.如权利要求1所述的一种解决植物组织培养中茎尖分生组织扁平化的组培方法，其特征在于，步骤(2)中所述促茎尖分生组织分化为芽的培养基II包括如下质量浓度的组分：NH4NO30.64g/l、KNO32.41g/l、MgSO4.7H2O0.25g/l、CaCl20.31g/l、KH2PO30.33g/l、盐酸硫胺素10mg/l，盐酸吡哆醇5mg/l，肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、KI0.83mg/l、H3BO36.2mg/l、MnSO4.4H2O22.3mg/l、ZnSO4.7H2O8.6mg/l、Na2MoO4.2H2O0.25mg/l、CuSO4.5H2O0.025mg/l、CoCl2.6H2O10mg/l、FeSO4.7H2O27.8mg/l、Na2‑EDTA37.3mg/l、白砂糖25g/l、IBA0.1mg/l、腺嘌呤30‑50pm、GA30.3mg/l、6‑BA1.5mg/l、AVG50ug/l、琼脂6g/l，PH：6.0。4.如权利要求1所述的一种解决植物组织培养中茎尖分生组织扁平化的组培方法，其特征在于，步骤(3)中所述促分化芽体复壮的培养基III包括如