一种犬X和Y精子分离液及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115109746A(43)申请公布日2022.09.27(21)申请号202210919720.2(22)申请日2022.08.02(71)申请人北京农学院地址102200北京市昌平区回龙观镇北农路7号(72)发明人肖龙菲王相国李旭魏华威倪和民郭勇盛熙晖齐晓龙邢凯龙城(74)专利代理机构北京维正专利代理有限公司11508专利代理师周春雨(51)Int.Cl.C12N5/076(2010.01)A01K67/02(2006.01)权利要求书1页说明书14页附图2页(54)发明名称一种犬X和Y精子分离液及其应用(57)摘要本申请涉及的技术领域，具体公开了一种犬X和Y精子分离液及其应用，所述犬X和Y精子分离液包括氯化钠、氯化钾、二水氯化钙、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、碳酸氢钠、苯酚红、D‑葡萄糖、丙酮酸钠、链霉素、青霉素、牛血清白蛋白、肌酸和R848；其中，所述R848的浓度为0.05~0.2μM。本申请还提供了犬X和Y精子分离试剂盒，包括上述犬X和Y精子分离液以及基础分离液和精子稀释液。本申请还提供了使用上述犬X和Y精子分离液以及犬X和Y精子分离试剂盒进行犬X和Y精子分离以及犬性别控制的方法。本申请所述犬X和Y精子分离液的分离效率高，成本低，对精子的损伤小，具有实际应用的价值。CN115109746ACN115109746A权利要求书1/1页1.一种犬X和Y精子分离液，其特征在于，所述犬X和Y精子分离液包括氯化钠、氯化钾、二水氯化钙、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、碳酸氢钠、苯酚红、D‑葡萄糖、丙酮酸钠、链霉素、青霉素、牛血清白蛋白、肌酸和R848；其中，所述R848的浓度为0.05~0.2μM。2.根据权利要求1所述的犬X和Y精子分离液，其特征在于，所述犬X和Y精子分离液包括氯化钠1.47~1.49g/L、氯化钾0.87~0.88g/L、二水氯化钙0.94~0.95g/L、磷酸二氢钾65~68mg/L、七水硫酸镁120~125mg/L、碳酸氢钠0.52~0.53g/L、苯酚红0.4~0.6mg/L、D‑葡萄糖0.62~0.63g/L、丙酮酸钠45~50mg/L、链霉素35~40mg/L、青霉素G55~60mg/L、牛血清白蛋白2~5g/L、肌酸490~510μM和R8480.05~0.2μM。3.一种犬X和Y精子分离试剂盒，其特征在于，所述犬X和Y精子分离试剂盒包括权利要求1或2所述的犬X和Y精子分离液。4.根据权利要求3所述的犬X和Y精子分离试剂盒，其特征在于，所述犬X和Y精子分离试剂盒还包括基础分离液和精子稀释液。5.根据权利要求4所述的犬X和Y精子分离试剂盒，其特征在于，所述基础分离液包括氯化钠1.471.49g/L、氯化钾0.870.88g/L、二水氯化钙0.940.95g/L、磷酸二氢钾6568~~~~mg/L、七水硫酸镁120~125mg/L、碳酸氢钠0.52~0.53g/L、苯酚红0.4~0.6mg/L、D‑葡萄糖0.62~0.63g/L、丙酮酸钠45~50mg/L、链霉素35~40mg/L、青霉素G55~60mg/L和牛血清白蛋白2~5g/L。6.根据权利要求4或5所述的犬X和Y精子分离试剂盒，其特征在于，所述精子稀释液包括氯化钠1.47~1.49g/L、氯化钾0.87~0.88g/L、二水氯化钙0.94~0.95g/L、磷酸二氢钾6568mg/L、七水硫~酸镁120~125mg/L、碳酸氢钠0.52~0.53g/L、苯酚红0.4~0.6mg/L、D‑葡萄糖0.62~0.63g/L、丙酮酸钠45~50mg/L、链霉素35~40mg/L、青霉素G55~60mg/L、牛血清白蛋白2~5g/L和肝素钠0.005~0.02mg/L。7.一种犬X和Y精子的分离方法，其特征在于，所述犬X和Y精子的分离方法包括：使用权利要求1或2所述的犬X和Y精子分离液和/或权利要求3~6任一项所述的犬X和Y精子分离试剂盒，对犬X和Y精子进行分离。8.根据权利要求7所述的犬X和Y精子的分离方法，其特征在于，所述犬X和Y精子的分离方法包括以下步骤：采集犬精液，与基础分离液混合，离心，弃上清；使用犬X和Y精子分离液重悬离心后的沉淀，孵育；取占孵育后液体总体积30%~85%的上层液体，离心后使用精子稀释液重悬沉淀，获得Y精子储液；取孵育后余下的下层液体，离心后使用精子稀释液重悬沉淀，获得X精子储液。9.一种犬性别控制方法，其特征在于，所述犬性别控制方法包括：对犬精液进行分离，获得Y精子储液和X精子储液；将获得的精子储液输送至母犬体内，妊娠后分娩。10.权利要求1或2所述的犬X和Y精子分离液和/或权利要求3~6任一项所述的犬X和Y精子分离试剂盒在犬性别控制方面的应用。2CN115109746A说明