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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115141771A(43)申请公布日2022.10.04(21)申请号202210761624.X(22)申请日2022.06.29(71)申请人中国农业大学地址100193北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人王磊张子薇杜显元李丹丹李嘉幸符杰莹(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002专利代理师张璐(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)B09C1/10(2006.01)C12R1/22(2006.01)C12R1/01(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称一种复合菌剂及其应用(57)摘要本发明涉及微生物技术领域,尤其涉及一种复合菌剂及其应用。本发明分离得到一种可降解石油的寡氮菌,其属于潘多拉菌属,本发明将其命名为潘多拉菌E5,其本身具备一定降解石油的能力。本发明进一步提供潘多拉菌E5和固氮菌PJ3‑5的组合,将这两种菌株组合后,可以有效提高潘多拉菌E5降解石油的能力,具体在降解石油中的各类烷烃和芳香烃的效率上显著提高。本发明提供的潘多拉菌E5和固氮菌PJ3‑5的互生组合可以实现氮素需求的供给,形成持续稳定的碳氮交互微环境,具备较高的石油降解效率,为石油污染的微生物修复技术提供优势菌种资源。CN115141771ACN115141771A权利要求书1/1页1.一种复合菌剂,其特征在于,所述复合菌剂包括:潘多拉菌E5和具有固氮能力的微生物。2.根据权利要求1所述的复合菌剂,其特征在于,所述具有固氮能力的微生物为固氮菌PJ3‑5。3.根据权利要求1或2所述的复合菌剂,其特征在于,所述潘多拉菌E5和所述具有固氮能力的微生物的菌落数比为(1~3):(1~3)。4.根据权利要求3所述的复合菌剂,其特征在于,所述菌剂中,所述潘多拉菌(Pandoraeapnomenusa)E5的菌落数为107~108cfu/g;和/或,所述具有固氮能力的微生物的菌落数为107~108cfu/g。5.权利要求1‑4任一项所述的复合菌剂在促进固氮菌生长中的应用。6.权利要求1‑4任一项所述的复合菌剂在降解石油中的应用。7.权利要求1‑4任一项所述的复合菌剂在降解C17‑C36的长链烷烃和芳香烃中的应用。8.权利要求1‑4任一项所述的复合菌剂在石油污染土壤的修复中的应用。2CN115141771A说明书1/5页一种复合菌剂及其应用技术领域[0001]本发明涉及微生物技术领域,尤其涉及一种复合菌剂及其应用。背景技术[0002]石油烃大量进入环境造成的C/N失衡已成为制约生物修复效率的关键因素之一。养分的可用性在决定碳氢化合物降解群落的性质方面起着重要作用,因此寻找这些外源氮肥的天然替代者,将成为未来生物修复的研究热点。微生物固氮是一种广泛应用的生物技术,作为无机氮改良的替代方法,并克服了修复过程中的营养缺乏等多种问题。将固氮菌引入污染土壤后,通过生物固氮作用可以为石油降解微生物提供所需的氮。固氮菌的这一特性使得此微生物群落适合于原位石油生物修复,而不需要补充外源氮素,是修复石油污染环境的优势菌种资源。[0003]石油烃作为重要的能源物质,在开采或运输中造成环境问题。作为持久性的有机污染物对生态系统造成破坏。环境污染,预防为主,治理为辅,石油污染治理仍是重要关注问题。生物修复是符合绿色发展要求的技术手段,但同时也存在一定的局限,有效氮的相对缺乏是限制生物修复效率的一个重要因素。发明内容[0004]为了解决现有技术的技术问题,本发明提供一种复合菌剂及其应用,通过组合潘多拉菌E5和具有固氮能力的固氮菌,可以有效降解环境中的石油污染。[0005]第一方面,本发明提供一种复合菌剂,所述复合菌剂包括:潘多拉菌E5和具有固氮能力的微生物。[0006]潘多拉菌E5公开于“李方玲,张雅坤,梁立宝,王小通,杜显元,王磊.石油污染环境中固氮和寡氮营养细菌的分离鉴定及其特性.微生物学报,2022,62(2):661‑671。是其中表3涉及的Pandoraeasp.E5。[0007]进一步地,所述具有固氮能力的微生物为固氮菌PJ3‑5。[0008]该微生物保藏编号为CGMCCNo.14658,公开于专利CN201810298858.9。[0009]本发明将在石油污染条件下具有高效固氮能力的固氮菌Klebsiellasp.PJ3‑5和能适应石油污染低氮环境的寡氮菌Pandoraeasp.E5进行复配,构建和培育适应贫氮环境的高效降解菌株组合,并探究生物修复主角‑微生物的协作机制,为提高生物修复技术的应用效果打下基础。[0010]进一步地,所述潘多拉菌E5和所述具有固氮能力的微生物的菌落数比为(1~3):(1~3)。[0011]进一步地,所述菌剂中,所述潘多拉菌(P