预览加载中,请您耐心等待几秒...
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲,该文档总共12页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~

如果您无法下载资料,请参考说明:

1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115191426A(43)申请公布日2022.10.18(21)申请号202210575731.3(22)申请日2022.05.24(71)申请人山西农业大学地址030031山西省太原市小店区龙城大街81号申请人山西猪巴巴种猪育种有限公司(72)发明人石磊张燕黄晓宇邢建东程煦曹果清孙迪史明月张燕伟靳天宇李文新(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002专利代理师黄爽(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图2页(54)发明名称提高猪精液冷冻保存品质的方法(57)摘要本发明提供一种提高猪精液冷冻保存品质的方法,通过向猪精液稀释液中添加0.01‑40μMMitoQ,冷冻保存,其中10μMMitoQ可明显改善冷冻保存的猪精液品质;同时提高猪精子的运动能力,提高精子质膜完整性、线粒体活性。MitoQ能够通过降低线粒体氧化损伤保护线粒体,降低细胞氧化应激水平,从而提高生殖细胞冷冻后活力,延长精子体外保存时间;同时,冷冻解冻后精子活力与对照组相比能提高15%左右。本发明操作简便,应用成本低,效果显著,对猪不产生任何有害影响。可以为猪精液保存提供一定的数据支撑,在猪精液保存及相关的胚胎移植产业和胚胎工程中广泛应用,具有广阔的市场前景。CN115191426ACN115191426A权利要求书1/1页1.MitoQ在提高猪精液冷冻保存品质中的应用。2.提高猪精液冷冻保存品质的方法,其特征在于,将猪精液与含有0.01‑40μMMitoQ的精液稀释液混合后进行冷冻。3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,精液稀释液中MitoQ的终浓度为5μM、10μM、20μM或40μM,优选10μM。4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,将采集的猪精液与预热至37℃的基础稀释液等体积混合进行稀释,在室温静置1‑2h,然后将猪精液与I液分别放入17℃恒温箱中平衡1‑2h;将平衡后的猪精液于17℃800g离心12‑20min;收集上清液并测定上清液的体积和密度,计算总精子数,如果上清液中精子数超过10亿则需再次离心;离心后弃上清,用预热至37℃的I液对精子进行重悬,重悬后使精子密度达到20亿/ml,将重悬后的猪精液从17℃降温到4℃,并将猪精液与Ⅱ液等体积混合后放入4℃冰箱中平衡0.5‑1h;最后,将平衡后的猪精液与4℃的II液等体积混合置于冻精细管中,于液氮中冷冻保存;其中,所述基础稀释液为:葡萄糖3.7g,EDTA0.125g,柠檬酸钠0.6g,碳酸氢钠0.125g,氯化钾0.075g,100IU青链霉素混合液10mL,加水定容至100mL;所述I液为:乳糖4.25g,海藻糖4.25g,20mL鸡蛋卵黄液,加水定容至100mL;所述II液为:甘油6mL,MitoQ5‑40μM,加入I液定容至100mL。5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,冷冻保存后,解冻的方法包括:将冻精细管从液氮中取出,放入50℃水浴锅内摇晃16s后取出,再将冻精细管中的猪精液与预热至37℃的基础稀释液混合,用于后续检测或实验。2CN115191426A说明书1/8页提高猪精液冷冻保存品质的方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域,具体地说,涉及一种提高猪精液冷冻保存品质的方法。背景技术[0002]近年来,猪人工授精在家畜养殖上得到愈来愈普遍的应用,尤其是对于规模化、集约化、专业化养殖,人工授精技术发挥了重要作用。精液冷冻保存技术保证了人工授精对精液的需求不受时间和地域的限制。冷冻保存技术使得采精和受精在时间和空间上产生了分离,延长了精子的体外储存时间,便于长途运输,促进了遗传资源跨地区、跨国界的交流和共享,加快了畜群品种改良步伐,使得优秀畜种得到大范围的推广。[0003]精子的冷冻保存是一个复杂的过程,为了获得令人满意的冻存结果,在冷冻过程中需要平衡多种因素。需要适宜的稀释剂、抗冻剂及其他添加剂,平衡温度和平衡时间、降温速率及解冻速率都是至关重要的,其每一项都有可能影响精液质量。在精液冷冻保存中,冷冻保护剂是精子超低温冻贮成功与否的关键。它主要作用是减少冷冻和解冻过程中细胞渗透性损伤和减少冰晶形成,细胞得以在超低温条件下保存。[0004]目前,冷冻保护剂主要分为渗透性冷冻保护剂(如甘油、乙二醇等)和非渗透性冷冻保护剂(如单糖、卵黄、白蛋白等)。一般认为卵黄由于富含卵磷脂,能提高细胞外渗透压,稳定精子细胞膜,防止顶体外膜破裂作用,研究表明,在非冷冻条件下,卵黄能促进精子与卵透明带结合,从而提高顶体反应率。然而由于卵黄和尿道球腺分泌物之间存在着有害的相互作用,会使复温后精子存活率下降。[0005]在过去的50年中冷冻精液技术迅猛发展,不同动物的精液冷冻都获