一种激素与农艺对上部烟叶烟碱含量调控机理的研究方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115299308A(43)申请公布日2022.11.08(21)申请号202210997413.6(22)申请日2022.08.19(71)申请人中国农业科学院烟草研究所（中国烟草总公司青州烟草研究所）地址266101山东省青岛市崂山区科苑经四路11号(72)发明人孙延国王玉林石屹王永张杨董小卫李强熊莹冯俊喜(74)专利代理机构北京维创华成知识产权代理事务所(普通合伙)16094专利代理师徐敏杰(51)Int.Cl.A01G22/45(2018.01)A01G7/06(2006.01)权利要求书2页说明书16页附图9页(54)发明名称一种激素与农艺对上部烟叶烟碱含量调控机理的研究方法(57)摘要本发明公开了一种激素与农艺对上部烟叶烟碱含量调控机理的研究方法，通过对打顶和激素效应和源库关系调控研究揭示打顶和激素对烟碱合成机理影响的原理，通过分期供氮效应和源库关系调控研究明确氮素参与烟碱合成的途径，并且以打顶时期与留叶数量、移栽期与施氮量进行生产验证实验，获得打顶与激素诱导烟碱合成的原因以及氮素参与机制，对科学降低烟碱含量，提升烟草品质和经济效益做出了指导。CN115299308ACN115299308A权利要求书1/2页1.一种激素与农艺对上部烟叶烟碱含量调控机理的研究方法，其特征在于，包括打顶与激素对烟碱合成与积累的影响机制研究、打顶前后氮素供应水平对烟碱合成与积累的影响机制研究以及生产验证，所述的生产验证包括打顶时期与留叶数对烟碱的影响研究以及施氮量与移栽期对上部叶片烟碱的影响研究。2.根据权利要求1所述的一种激素与农艺对上部烟叶烟碱含量调控机理的研究方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤一：打顶与激素对烟碱合成与积累的影响机制研究采用穴盘育苗培育烟苗，2‑3片真叶时移栽至盆钵中，长至六叶一心时选取长势一致、粗壮的烟株移栽至花盆中，每3d浇灌一次Hoagland培养液，15天后分组进行打顶以及激素处理，处理进行5d、10d时，获取每组的植株的上部叶片、根系、上部叶片烟碱和总氮含量，处理进行6h、12h、24h、5d时，获取根系氮代谢关键酶活性、基因相对表达量，进而获取打顶与激素对各指标的影响，以根系性状作为源指标、叶片性状作为库指标，获取基于打顶与激素的烟碱源库关系；步骤二：打顶前后氮素供应水平对烟碱合成与积累的影响机制研究采用穴盘育苗培育烟苗，2‑3片真叶时移栽至盆钵中，长至六叶一心时选取长势一致、粗壮的烟株移栽至花盆中，每3d浇灌一次Hoagland培养液，15天后分组进行打顶前后氮素供应以及供应量的处理，处理进行5d、10d时，获取每组的植株的上部叶片、根系、上部叶片烟碱和总氮含量，处理进行6h、12h、24h、5d时，获取根系氮代谢关键酶活性、基因相对表达量，进而获取打顶与激素对各指标的影响，以根系性状作为源指标、叶片性状作为库指标，获取打顶前后氮素供应水平的烟碱源库关系；步骤三：打顶时期与留叶数对烟叶烟碱的影响研究采用生长一致的植株，分组进行不同时期打顶，同时每个打顶时期再次分组，每组留叶数不同，获取不同处理的对植株的农艺性状、单叶重以及烟碱含量的影响；步骤四：移栽时期与施氮量对上部烟叶烟碱的影响研究采用生长一致的植株，分组进行不同时期移栽，同时每个移栽时期再次分组进行不同量的施氮处理，获取不同处理的对植株的农艺性状、干物质积累、上部叶片性状以及烟碱含量的影响；步骤五：依据步骤一‑步骤四的研究，获取打顶、氮素与激素调控上部烟叶烟碱合成与积累的具体通路。3.根据权利要求2所述的一种激素与农艺对上部烟叶烟碱含量调控机理的研究方法，其特征在于，步骤一中分为八个处理组，分别为：不打顶、打顶、不打顶+100μmol/LMeJA、打顶+2mmol/L、不打顶+80μmol/L、打顶+20μmol/LNAA、不打顶+100μmol/LMeJA+80μmol/LNPA、打顶+2mmol/LSHAM+20μmol/LNAA。4.根据权利要求2所述的一种激素与农艺对上部烟叶烟碱含量调控机理的研究方法，其特征在于，步骤二中分为七个处理组，分别为：3个打顶前氮处理组：0mmol/LN、10mmol/LN、15mmol/LN，处理完毕后打顶，打顶后氮浓度均为5mmol/LN；3个打顶后氮处理组：0mmol/LN、10mmol/LN、15mmol/LN，处理完毕后氮浓度均为5mmol/LN；2CN115299308A权利要求书2/2页1个对照组：打顶前后氮浓度均为5mmol/LN。5.根据权利要求2所述的一种激素与农艺对上部烟叶烟碱含量调控机理的研究方法，其特征在于，步骤一和步骤二中根系氮代谢关键酶为NR、GS，基因相对表达量具体为根系JA、IAA相关基因表达、根系烟碱合成及转运