出芽短梗霉在发酵生产普鲁兰多糖中的应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115637278A(43)申请公布日2023.01.24(21)申请号202211388013.1C12N1/14(2006.01)(22)申请日2022.11.08C12R1/645(2006.01)(83)生物保藏信息CCTCCNO：M202212722022.08.12(71)申请人山东省农业科学院地址250100山东省济南市历城区工业北路202号(72)发明人杨金玉陈蕾蕾赵双枝周庆新李熙文张彦昊辛雪裘纪莹王军华杨晓宇姜潇潇祝清俊(74)专利代理机构济南市易拓知识产权代理事务所(普通合伙)37325专利代理师江莉莉(51)Int.Cl.C12P19/10(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图3页(54)发明名称出芽短梗霉在发酵生产普鲁兰多糖中的应用(57)摘要本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一株出芽短梗霉菌株应用于生产普鲁兰多糖中。其分类命名为出芽短梗霉NCPS2022‑M，该菌株已于2022年08月12日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M20221272。本发明所述及的出芽短梗霉NCPS2022‑M在生产普鲁兰多糖中应用后，与传统的普鲁兰多糖生产方法相比，能显著的提高普鲁兰多糖的产量。具体来说，上述的出芽短梗霉菌在200g/L的葡萄糖浓度下能产生162.3g/L普鲁兰多糖，产率为0.82g/g葡萄糖。CN115637278ACN115637278A权利要求书1/1页1.出芽短梗霉在发酵生产普鲁兰多糖中的应用，其特征在于：其分类命名为：出芽短梗霉AureobasidiumpullulansNCPS2022‑M，于2022年08月12日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M20221272。2.含有如权利要求1所述的出芽短梗霉的菌群在发酵生产普鲁兰多糖中的应用。3.含有如权利要求1所述的出芽短梗霉的菌剂在发酵生产普鲁兰多糖中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的菌剂为粉状菌剂或含有出芽短梗霉的菌液。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于：将出芽短梗霉的菌种进行活化、种子培养、发酵培养，以此获得普鲁兰多糖；发酵培养时，所采用的培养基中含有葡萄糖，且其浓度为190～210g/L。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：菌种活化的步骤如下：将出芽短梗霉好氧培养，然后将培养的接种物转移到YPD琼脂平板中进行活化培养。7.如权利要求5所述的应用，其特征在于：种子培养步骤中，将活化培养的菌株接种在种子培养物中，并在28℃下以220rpm的转速孵育24小时。8.如权利要求5所述的应用，其特征在于：发酵培养中，将经过种子培养所获得的培养菌体转移到普鲁兰多糖生产培养基中，发酵，得到普鲁兰多糖。9.如权利要求5所述的应用，其特征在于：发酵培养中，所采用的培养基如下：190～210g/L葡萄糖、5～9g/L豆粕水解物、4～8g/L氯化钾、2～5g/L氯化钠、0.1～0.3g/L硫酸铵、0.05～0.25g/L硫酸镁和10～20g/L食品级轻质CaCO3。10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所采用的培养基如下：200g/L葡萄糖、7.01g/L豆粕水解物、6g/L氯化钾、3.44g/L氯化钠、0.18g/L硫酸铵、0.1g/L硫酸镁和16g/L食品级轻质CaCO3。2CN115637278A说明书1/10页出芽短梗霉在发酵生产普鲁兰多糖中的应用技术领域[0001]本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及出芽短梗霉在发酵生产普鲁兰多糖中的应用。背景技术[0002]普鲁兰多糖是出芽短梗霉(Aureobasidiumpullulans)产生的胞外多糖，极具应用价值，但其生产成本较高，而且其产糖机制尚未得到完全阐明，在一定程度上限制了它的广泛应用。[0003]现有技术中微生物发酵是生产普鲁兰的主要生产方法，因菌种的差异、培养基成分、发酵条件的不同，对普鲁兰多糖的产量影响也比较大。葡萄糖很容易通过淀粉水解获得，但由于高浓度葡萄糖引起的高度渗透环境的抑制作用，现有菌株无法在高葡萄糖浓度下有效地生产普鲁兰。同时也有研究通过诱变和代谢工程研究来改善普鲁兰多糖的生产，但产量提升不明显，如Wang,Qin‑Qing等(CreAisdirectlyinvolvedinpullulanbiosynthesisandregulationofAureobasidiummelanogenumP16，CURRENTGENETICS，2017年06期)研究，虽然编码葡萄糖抑制剂的CREA基因的敲除，但DG41仅从120g/L葡萄糖中产生64.93g/L普鲁兰多糖。[0004]因此，寻找普鲁兰多糖高产菌株以期进一步提高普鲁兰多糖产量，具有