一种抗病水稻品种的育种方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115735756A(43)申请公布日2023.03.07(21)申请号202211272266.2(22)申请日2022.10.18(71)申请人长江大学地址434000湖北省荆州市荆州区南环路1号(72)发明人徐俊英李青扬马伦杨欧江冰李志新(74)专利代理机构重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙)50230专利代理师杨逍(51)Int.Cl.A01H1/02(2006.01)A01H1/04(2006.01)C12N15/82(2006.01)C12N15/29(2006.01)权利要求书2页说明书12页附图1页(54)发明名称一种抗病水稻品种的育种方法(57)摘要本发明属于水稻育种技术领域，公开了一种抗病水稻品种的育种方法，以恢复系R86为受体，利用携稻瘟病抗性基因Pi2和携白叶枯抗性基因Xa7，Xa21和Xa23的优良品种为供体材料，采用杂交、回交和聚合杂交结合分子标记辅助选择、抗性鉴定和农艺性状分析，将抗性基因导入到受体材料中进行稻瘟病和白叶枯病抗性的遗传改良；对BC3F1和聚合世代中选单株进行连续自交，每个自交世代均进行标记筛选、抗性鉴定、农艺性状的选择和产量测定，得到抗稻瘟病和白叶枯病杂交稻亲本材料，选育拥有多种抗性的杂交稻亲本。本发明选用的恢复系配制的多个杂交组合通过国家和省级审定，推广面积较大，杂种优势强。CN115735756ACN115735756A权利要求书1/2页1.一种抗病水稻品种的育种方法，其特征在于，所述抗病水稻品种的育种方法包括：以恢复系R86为受体，利用携稻瘟病抗性基因Pi2和携白叶枯抗性基因Xa7，Xa21和Xa23的优良品种为供体材料，采用杂交、回交和聚合杂交结合分子标记辅助选择、抗性鉴定和农艺性状分析，将抗性基因导入到受体材料中进行稻瘟病和白叶枯病抗性的遗传改良；对BC3F1和聚合F1单株进行连续自交，每个世代均进行标记筛选、抗性鉴定、农艺性状的选择和产量测定，得到抗稻瘟病和白叶枯病杂交稻亲本材料，选育拥有多种抗性的杂交稻亲本。2.如权利要求1所述抗病水稻品种的育种方法，其特征在于，所述抗病水稻品种的育种方法包括以下步骤：步骤一，DNA提取和选择标记；步骤二，建立PCR扩增反应体系；步骤三，分子标记辅助抗性改良；步骤四，白叶枯病人工抗性鉴定；步骤五，稻瘟病自然诱发抗性鉴定；步骤六，主要农艺性状调查和优势组合筛选。3.如权利要求2所述抗病水稻品种的育种方法，其特征在于，所述步骤一中的DNA提取和选择标记包括：采用简化的CTAB法进行DNA提取；与Pi2紧密连锁的标记AP22，与Xa7基因紧密连锁标记RM20582，与Xa21紧密连锁的标记PTA248，Xa23紧密连锁的标记M‑Xa23，进行分子标记辅助选择，聚丙烯凝胶电泳分析各世代的阳性单株。4.如权利要求2所述抗病水稻品种的育种方法，其特征在于，所述步骤二中的PCR扩增反应体系的建立包括：20μl的扩增反应体系包括20ng模板DNA，2μl的10×buffer、1.8μl的2.5mMMgCl2、1.8μl的2mMdNTP、10μM的正反引物各0.2μl，1.5U的Tag酶0.2μl，加灭菌的双蒸水至20μl，进行PCR扩增；反应程序为94℃下预变性5min，94℃30s、55℃30s、72℃45s循环反应34次，72℃延伸反应10min后于4℃保存，扩增产物在2.5％琼脂糖胶或4％聚丙烯酰胺PAGE凝胶电泳后用GoldView或硝酸银染检测。5.如权利要求4所述抗病水稻品种的育种方法，其特征在于，所述pTA248的退火温度为60℃。6.如权利要求2所述抗病水稻品种的育种方法，其特征在于，所述步骤三中的分子标记辅助抗性改良包括：以R86为受体亲本，分别与农艺形状优良、携白叶枯和稻瘟病抗性基因的恢复系做供体亲本，进行杂交和聚合杂交，回交3次，自交3次；结合标记筛选与抗性鉴定筛选含有抗性基因的F2单株进行连续自交，每个自交世代均进行标记筛选、抗性鉴定与农艺性状的选择开展抗稻瘟病杂交稻组合测配；创制抗稻瘟病和白叶枯病的杂交稻亲本材料，并开展拥有多种抗性的杂交稻亲本的选育。7.如权利要求2所述抗病水稻品种的育种方法，其特征在于，所述步骤四中的白叶枯病人工抗性鉴定包括：2CN115735756A权利要求书2/2页在水稻孕穗盛期，采用剪叶法接种；接种前5天取出保存于‑70℃冰箱中的菌株，用PDA斜面培养基，在28℃的温箱中活化培养2～3天后，转管扩大培养3天；接种前用无菌水洗脱菌落，悬浮均匀，调整菌悬液浓度至3×108cfu/ml；接种时选取主茎剑叶平展的叶片，剪刀沾取菌悬液平置，刀尖稍向上，剪去叶尖2～3cm，每株剪3～5片叶，每区材料剪叶片数大于30片；接种过程中，不同菌株处理重换