玉米ZmRAFS基因用于提高玉米耐储藏能力的应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115786392A(43)申请公布日2023.03.14(21)申请号202211541246.0(22)申请日2022.12.02(71)申请人西北农林科技大学地址712100陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号(72)发明人赵天永刘应(74)专利代理机构西安恒泰知识产权代理事务所61216专利代理师史玫(51)Int.Cl.C12N15/82(2006.01)A01H6/46(2018.01)A01H5/10(2018.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称玉米ZmRAFS基因用于提高玉米耐储藏能力的应用(57)摘要本发明公开了玉米ZmRAFS基因用于提高玉米耐储藏能力的应用。本发明通过在玉米中超表达ZmRAFS基因，提高了玉米的耐储藏能力。CN115786392ACN115786392A权利要求书1/1页1.玉米ZmRAFS基因用于提高玉米耐储藏能力的应用，所述玉米ZmRAFS基因序列如SEQIDNO:1所示，或者，所述玉米ZmRAFS基因编码的蛋白序列如SEQIDNO:2所示。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，通过在玉米中超表达玉米ZmRAFS基因提高玉米的耐储藏能力。2CN115786392A说明书1/5页玉米ZmRAFS基因用于提高玉米耐储藏能力的应用技术领域[0001]本发明涉及玉米ZmRAFS基因的新应用，具体涉及玉米ZmRAFS基因用于提高了玉米耐储藏能力的应用。背景技术[0002]发明人前期研究成果公开了在拟南芥中过量表达玉米ZmRAFS基因降低了拟南芥种子的耐储藏能力(Li,T.,etal.,RaffinosesynthaseenhancesdroughttolerancethroughraffinosesynthesisorgalactinolhydrolysisinmaizeandArabidopsisplants.JournalofBiologicalChemistry.2020.295:8064‑8077)。发明内容[0003]发明人研究发现玉米ZmRAFS基因(GRMZM2G150906)在玉米中过量表达，可提高玉米种子的耐储藏能力。[0004]基于此，本发明提供了玉米ZmRAFS基因用于促进玉米种子耐储藏的应用，所述玉米ZmRAFS基因序列如SEQIDNO:1所示，或者，所述玉米ZmRAFS基因编码的蛋白序列如SEQIDNO:2所示。具体方案中，通过在玉米中超表达玉米ZmRAFS基因提高了玉米的耐储藏能力。附图说明[0005]图1为本发明实施例玉米超表达载体示意图；其中：pUbi:玉米Ubiquitin启动子；NOS:终止子；p35S:花椰菜花叶病毒35S启动子；Bar:抗除草剂基因；Tvsp:终止子；HindIII,EcoRV:限制性酶切位点。箭头所示F1,R1,F2,R2,F3,R3为图2说明中PCR引物位置。[0006]图2为本发明实施例超表达ZmRAFS基因后玉米株系叶片ZmRAFS基因表达量提高；(A)玉米超表达ZmRAFS转基因株系的PCR鉴定；Marker:DNA分子量；Control:水做负对照；Zong31:玉米综31自交系基因组DNA；Plasmid:质粒DNA,作正对照；pTF101.1‑ZmRAFS(1‑9):超表达ZmRAFS的9个独立转化事件；(B)玉米超表达ZmRAFS转基因株系叶片ZmRAFSmRNA表达水平高于对照；Zong31:玉米综31自交系；ZmRAFS#1,2,3为超表达ZmRAFS基因的3个株系(综31背景)；ZmGAPDH:甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶基因mRNA表达水平，作内参；(C)玉米超表达ZmRAFS转基因株系叶片ZmRAFS蛋白表达水平高于对照；Zong31:玉米综31自交系；ZmRAFS#1,2,3为超表达ZmRAFS基因的3个株系(综31背景)；ZmGAPDH:甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶蛋白，作内参。[0007]图3为本发明实施例超表达ZmRAFS基因提高提高玉米种子耐储藏能力(耐老化能力)相关结果；(A)老化处理的ZmRAFS过表达株系与综31自交系种子萌发表型，标尺＝5cm；(B)老化处理的ZmRAFS过表达株系及其综31自交系种子萌发速率比较；每个株系3个生物学重复，每个重复50粒种子；(C～D)老化处理后ZmRAFS过表达玉米株系及其综31自交系种子吸胀120h后胚芽(C)、胚根(D)长度比较；Zong31：玉米综31自交系；ZmRAFS(#1,#2,#3)：3CN115786392A说明书2/5页ZmRAFS转基因株系；数据表示均值±标准误，每个灰点代表1个生物学重复，每个株系3个生物学重复；不同的小写字母代表差异显著(Duncantest，P<0.0