一种提高卵形鲳鲹成活率的养殖方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115887630A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202211408666.1(22)申请日2022.11.02(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人莫泽权吴辉城李雄洪宇豪郭文杰王凯旸李言伟但学明(51)Int.Cl.A61K39/002(2006.01)A61K39/39(2006.01)A61P33/02(2006.01)A61P37/04(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种提高卵形鲳鲹成活率的养殖方法(57)摘要本发明旨在解决卵形鲳鲹养殖过程中感染刺激隐核虫后死亡率高的问题，提供一种提高卵形鲳鲹成活率的养殖方法，在卵形鲳鲹养殖过程中，前期注射磷酸锰胶体，后期注射锰胶体佐剂疫苗，大大提高了卵形鲳鲹的抗病成活率。本发明也旨在解决刺激隐核虫疫苗免疫保护效果不佳的技术问题，在卵形鲳鲹养殖前期注射磷酸锰胶体，先初步激活卵形鲳鲹的免疫系统，再在卵形鲳鲹养殖后期注射锰胶体佐剂刺激隐核虫疫苗，进一步加强激活卵形鲳鲹的免疫系统，使得卵形鲳鲹对刺激隐核虫的抵抗力达到最佳，解决了单用普通刺激隐核虫疫苗而免疫保护率低的问题。CN115887630ACN115887630A权利要求书1/1页1.一种提高卵形鲳鲹成活率的养殖方法，其特征在于：将卵形鲳鲹鱼苗投入养殖池，待鱼苗长至7‑10cm时，向鱼苗腹腔注射磷酸锰胶体，注射剂量为每尾0.1ml；待鱼苗长至12‑15cm时，向鱼苗皮下注射锰胶体佐剂抗刺激隐核虫疫苗，注射剂量为每尾0.1ml，疫苗注射14天后，进行加强免疫，即再次向鱼苗皮下注射锰胶体佐剂抗刺激隐核虫疫苗，注射剂量仍为每尾0.1ml。所述磷酸锰胶体的制备方法如下：取15ml离心管，分别加入8ml蒸馏水、500ul18％NaCl、500ulNa3PO4、1ml0.2MMnCl2，上下颠倒混匀20‑30min后即可。所述锰胶体佐剂抗刺激隐核虫疫苗的制备方法如下：(1)、首先用含青霉素、链霉素和两性霉素B的PYY培养液复苏实验室保存的嗜热四膜虫，30℃静置培养后将虫液转至NEFF培养基中；(2)四膜虫的扩大培养：往10mlNEFF培养基加入1ml复苏后的四膜虫，30℃、100rpm培养24h后将虫液转移至250mlNEFF培养基，继续培养24h后即可获得大量四膜虫；(3)四膜虫抗原的获取：将含大量四膜虫的培养基置于冰上静置10min后，低速离心去除培养基溶液；加入10mMTris‑HCl溶液清洗一遍后，加入30ml含10mMTris‑HCl、0.5Msucrose、0.2MCacl2的缓冲液重悬四膜虫，将虫液等体积缓慢加入5％蔗糖溶液中，4000rpm水平离心15min后，取白色上层溶液即为免疫所用抗原；(4)、疫苗的制备：将抗原透析至0.9％NaCl溶液中，调节pH为7.0以及调节抗原浓度为2mg/L，随后与上述磷酸锰胶体等体积混匀。2CN115887630A说明书1/4页一种提高卵形鲳鲹成活率的养殖方法技术领域[0001]本发明属于水产养殖领域，具体涉及一种提高卵形鲳鲹成活率的养殖方法.背景技术[0002]卵形鲳鲹是我国南方地区养殖的重要海水鱼类，但随着养殖规模的不断扩大及养殖环境的恶化等，其寄生虫病害暴发日趋频繁。刺激隐核虫是感染我国华南地区海水养殖鱼类类最严重的一种寄生虫，主要感染海水硬骨鱼类，引发致死性、暴发性传染病，对广东、广西、福建等地的海水养殖业造成巨大经济损失。卵形鲳鲹是我国沿海地区重要的海水养殖鱼类，其肉质鲜美、营养丰富，具有很高的经济价值。刺激隐核虫病是卵形鲳鲹养殖中的常见病害，病害的频发也给卵形鲳鲹养殖业造成巨大的经济损失.如何高效且安全地防治卵形鲳鲹刺激隐核虫病一直是国内外研究的热点问题.刺激隐核虫的生活史包括四个阶段，其中对养殖鱼类危害最大的是寄生于宿主体表的滋养体阶段，而最易被杀灭的阶段是游离幼虫阶段。包囊生活史阶段的刺激隐核虫有数层包囊壁，层与层之间有致密物质，包囊外层很难破碎，普通药物难以进入包囊内部，故传统防治方法主要针对刺激隐核虫幼虫进行杀灭。目前海水养殖石斑鱼病虫害的防治方法主要包括化学药剂防治法、物理防治法、中草药防治、免疫防治和生态防治法等。通过杀灭养殖水体中的病原生物可起到病害的防治作用，但传统防治方法存在成本高、对养殖鱼危害大、防治效果不佳等问题。[0003]刺激隐核虫(Cryptocaryonirritans)属原生动物门、纤毛亚门、寡膜纤毛纲、膜口亚纲、膜口目、凹口科、隐核虫属，常寄生于海水硬骨鱼类的体表和鳃，引起鱼类的传染性疾病。该寄生虫宿主范围广，可以感染几乎所有的海水硬骨鱼类。尽管危害如此严重，但由于该虫寄生部位独特、生活史复杂