柿单宁生物合成正调控转录因子DkMYB21基因、蛋白质及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115925843A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210878499.0A01H5/00(2018.01)(22)申请日2022.07.25A01H5/12(2018.01)A01H6/00(2018.01)(71)申请人华中农业大学C12R1/01(2006.01)地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号(72)发明人张青林郑庆游陈文兴徐莉清郭大勇罗正荣(74)专利代理机构武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙)42231专利代理师姜婷(51)Int.Cl.C07K14/415(2006.01)C12N15/29(2006.01)C12N15/84(2006.01)C12N1/21(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表5页附图2页(54)发明名称柿单宁生物合成正调控转录因子DkMYB21基因、蛋白质及其应用(57)摘要本发明公开了柿单宁生物合成正调控转录因子DkMYB21基因、蛋白质及其应用，所述转录因子DkMYB21的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，或其核苷酸序列为在SEQIDNO:1所示序列中存在一个或多个核苷酸的缺失、添加和/或取代但功能不变的序列。本发明从不同脱涩类型柿品种数据库中筛选得到在果实发育早期特异表达的DkMYB21基因，其可正调控柿中单宁的生物合成，在柿叶片和果实中沉默DkMYB21基因后可显著降低可溶性单宁的累积，为主栽涩柿的“甜柿化”改造提供了重要的基因资源。CN115925843ACN115925843A权利要求书1/1页1.一种正调控柿单宁合成的转录因子DkMYB21，其特征在于，所述转录因子DkMYB21的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，或其核苷酸序列为在SEQIDNO:1所示序列中存在一个或多个核苷酸的缺失、添加和/或取代但功能不变的序列。2.一种由权利要求1所述转录因子DkMYB21编码的蛋白质。3.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求1所述的转录因子DkMYB21。4.一种重组菌，其特征在于，包含权利要求1所述的转录因子DkMYB21，或包含权利要求3所述的重组表达载体。5.一种调控柿单宁生物合成的方法，其特征在于，将权利要求1所述的转录因子DkMYB21导入柿生物材料中得到转基因植株。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，获得所述转基因植株的方法具体为：将包含所述转录因子DkMYB21的片段连接到载体上，通过农杆菌介导转化法侵染柿生物材料中，并筛选培养获得转基因植株。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述柿生物材料为柿组培苗或柿下胚轴。8.权利要求1所述的转录因子DkMYB21，或权利要求3所述的重组表达载体，或权利要求4所述的重组菌在调节柿单宁生物合成中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，将重组表达载体导入柿组织的细胞中，通过影响DkMYB21表达量调控单宁的生物合成。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述柿组织为柿叶、柿组培苗或柿下胚轴。2CN115925843A说明书1/6页柿单宁生物合成正调控转录因子DkMYB21基因、蛋白质及其应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种正调控柿单宁(原花色素)生物合成的转录因子DkMYB21的基因序列、蛋白质序列，以及其在涩柿“甜柿化”改造中的应用。背景技术[0002]柿(DiospyroskakiThunb.)为柿科(Ebenaceae)柿属(DiospyrosLinn.)木本果树，原产我国，后传播到日本和韩国并被广泛种植。根据果实成熟时能否自然脱涩及其性状遗传特点，现有柿品种分完全甜柿和非完全甜柿两大类。完全甜柿成熟后无需任何处理可直接脆食，改善了果实商品的鲜食体验，且方便运输和贮藏，因而更受市场青睐。非完全甜柿可进一步分为不完全甜柿、不完全涩柿和完全涩柿。非完全甜柿在成熟期时果肉中仍含有大量的可溶性单宁，是果实产生涩感的主要原因，需经脱涩处理后方可食用。但由于人工脱涩成本较高，费时费力，且脱涩后的果实极易软化，不耐贮运，货架期较短，商品价值较低，经济效应及食用体验不佳。因此，可自然脱涩的完全甜柿既是产业发展的主要对象，也是遗传改良的重点目标，但目前国内外甜柿主栽品种均源自日本。日本甜柿不太适应我国“上山下滩”的土壤条件，且部分优质品种与我国习用的砧木君迁子(DiospyroslotusL.)嫁接亲和性较差；此外，由于日本甜柿骨干亲本起源地狭窄，其遗传背景较近，长期的相互杂交已引发较严重的近交衰退现象。因此，培育具有自主知识产权的中国甜柿新品种是我国柿产业可持续发展亟待解决的“瓶颈”问题。[0003]柿果果肉单宁细胞中含有大量的缩合单宁，即原花色素(proant