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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927307A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210878631.8(22)申请日2022.07.25(71)申请人中国农业科学院植物保护研究所地址100193北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人梁革梅张彩虹汤金荣于思琪(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002专利代理师商秀玲(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)A01N63/23(2020.01)A01P7/04(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表1页附图2页(54)发明名称棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在提高苏云金芽孢杆菌的杀虫活性中的应用(57)摘要本发明涉及农业害虫生物防治技术领域,具体涉及棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在提高苏云金芽孢杆菌的杀虫活性中的应用。本发明提供棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因或棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的抑制剂在提高苏云金芽孢杆菌或其杀虫蛋白对棉铃虫的杀虫活性中的应用。本发明利用siRNA干扰棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因,使得棉铃虫中肠的胰蛋白酶活性显著升高,Bt或其杀虫蛋白对棉铃虫的杀虫活性显著提高。本发明提供的方法可用于提高Bt防治棉铃虫的效果,并对Cry1Ac抗性棉铃虫起到抗性治理的作用,使其恢复对Cry1Ac的敏感性,在田间棉铃虫的防治和棉铃虫的绿色防控中具有很好的应用前景。CN115927307ACN115927307A权利要求书1/1页1.棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因或棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的抑制剂在提高苏云金芽孢杆菌或其杀虫蛋白对棉铃虫的杀虫活性中的应用。2.苏云金芽孢杆菌或其杀虫蛋白以及棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的抑制剂和/或胰蛋白酶在棉铃虫防治中的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述丝氨酸蛋白酶抑制剂基因为serpin‑e。4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的抑制剂为靶向棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的siRNA;优选地,所述siRNA的结合靶序列的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。5.一种防治棉铃虫的制剂,其特征在于,所述制剂包含苏云金芽孢杆菌或其杀虫蛋白以及棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的抑制剂和/或胰蛋白酶。6.根据权利要求5所述的防治棉铃虫的制剂,其特征在于,所述丝氨酸蛋白酶抑制剂基因为serpin‑e。7.根据权利要求6所述的防治棉铃虫的制剂,其特征在于,所述棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的抑制剂为靶向棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的siRNA;优选地,所述siRNA的结合靶序列的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。8.一种防治棉铃虫的方法,其特征在于,所述方法包括:向棉铃虫施用苏云金芽孢杆菌或其杀虫蛋白以及棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的抑制剂和/或胰蛋白酶。9.根据权利要求8所述的防治棉铃虫的方法,其特征在于,所述丝氨酸蛋白酶抑制剂基因为serpin‑e。10.根据权利要求9所述的防治棉铃虫的方法,其特征在于,所述棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的抑制剂为靶向棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的siRNA;优选地,所述siRNA的结合靶序列的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2CN115927307A说明书1/5页棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在提高苏云金芽孢杆菌的杀虫活性中的应用技术领域[0001]本发明涉及农业害虫生物防治技术领域,尤其涉及棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在提高苏云金芽孢杆菌的杀虫活性中的应用。背景技术[0002]苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)是一种革兰氏阳性细菌,产生的伴孢晶体蛋白(杀虫蛋白),对鳞翅目(Lepidoptera)、双翅目(Diptera)、鞘翅目(Coleoptera)、膜翅目(Hymenoptera)等多种昆虫具有特异性的杀虫活性。由于Bt的杀虫特异性以及对环境、人畜和非靶标昆虫安全等特点,Bt杀虫基因被首选在抗虫转基因作物中应用。Bt杀虫蛋白被昆虫取食后,在中肠蛋白酶的作用下Bt原毒素被活化,水解为有活性的毒素,有活性的毒素进一步与昆虫中肠的特异性受体结合、诱导形成寡聚化毒素、寡聚物插入到中肠上皮细胞膜内,形成孔洞,导致细胞膨胀和裂解,最终造成昆虫死亡。[0003]由于杀虫剂的长期使用或者害虫一直处于转基因作物表达蛋白的选择压力下,害虫不可避免的会对杀虫剂或杀虫蛋白产生抗性。丝氨酸蛋白酶主要分为两大类:胰蛋白酶(Trypsin)和胰凝乳蛋白酶(Chymotrypsin),其中胰蛋白酶是昆虫体内含量最丰富的消化酶。丝氨酸蛋白酶作为鳞翅目昆虫重要的肠道消化酶,不仅参与Bt毒素的水解活化过程,而且已有研究报道表明,由于中肠消化酶的表达缺失或者过表达,可造