与玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9紧密连锁的分子标记及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115961081A(43)申请公布日2023.04.14(21)申请号202211677741.4(22)申请日2022.12.26(71)申请人四川农业大学地址611130四川省成都市温江区惠民路211号(72)发明人刘亚西林宇汪青军李超牟俞州陆一榕王若颜张莹王智强李彩霞(74)专利代理机构北京东方盛凡知识产权代理有限公司11562专利代理师牛娟妮(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表（电子公布）附图2页(54)发明名称与玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9紧密连锁的分子标记及其应用(57)摘要本发明公开了与玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9紧密连锁的分子标记及其应用，属于分子生物学及遗传育种。该分子标记的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示，在所述核苷酸序列的第21位碱基处，碱基突变为G或T；所述分子标记K1207与玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9共定位于玉米9号染色体上，且位于Bin_9.004‑Bin_9.005区段内。本发明公开的分子标记K1207与抗茎基腐病基因位点qFCR9显著相关，呈现紧密连锁标记特征，用于分子标记辅助选择的准确性高，提高适应不同环境的玉米特定抗茎基腐病品种的选择鉴定效率，且成功率高，可大大加快玉米抗病品种的选育进程。CN115961081ACN115961081A权利要求书1/1页1.与玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9紧密连锁的分子标记K1207，其特征在于，所述分子标记K1207的核苷酸序列如SEQIDNO：4所示，在所述核苷酸序列的第21位碱基处，碱基突变为G或T；所述分子标记K1207与玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9共定位于玉米9号染色体上，且位于Bin_9.004‑Bin_9.005区段内。2.一种引物组，其特征在于，包括用于扩增权利要求1所述分子标记K1207的两条特异性正向引物和一条特异性反向引物，两条所述特异性正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO：1‑2所示，所述特异性反向引物的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。3.一种检测玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9的试剂盒，其特征在于，包含权利要求2所述的引物组。4.一种权利要求1所述的分子标记K1207或权利要求2所述的引物组或权利要求3所述的试剂盒的应用，其特征在于，用于如下任一项应用中：(1)鉴定玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9；(2)筛选抗茎基腐病的玉米品种或品系；(3)玉米分子标记辅助育种；(4)改良玉米种质资源。5.一种筛选含有玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9的玉米株系方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测玉米样品的基因组DNA作为模板，利用权利要求2所述的引物组对模板进行荧光定量PCR扩增，利用扩增结果判断玉米株系。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR扩增的反应体系为：2×KASPMastermix5μL，KASPAssayMix1.4μL，模板DNA1μL、Dnase/RNase‑free去离子水2.6μL；其中，所述KASPAssayMix包含如SEQIDNO：1‑3所示的引物组，所述引物组的体积比依次为2：2：5。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR扩增的程序为：95℃预变性15min；95℃变性20s，61℃退火延伸60s，循环10次，每次退火延伸温度降低0.6℃；95℃变性20s，55℃退火延伸40s，循环34次；25℃60s，采集荧光信号。8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，若扩增结果显示权利要求1中的所述分子标记K1207的碱基突变为G，则待测玉米样品为含有玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9的玉米株系；若显示所述分子标记K1207的碱基突变为T，则待测玉米样品为不含有玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9的玉米株系。9.根据权利要求5‑8任一项所述的方法在玉米分子育种、培育转基因玉米和玉米种质资源改良中应用。10.一种权利要求1所述的分子标记K1207或所述的玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9在筛选抗茎基腐病的玉米品种或品系中的应用。2CN115961081A说明书1/7页与玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9紧密连锁的分子标记及其应用技术领域[0001]本发明涉及分子生物学及遗传育种领域，特别是涉及与玉米抗茎基腐病基因位点qFCR9紧密连锁的分子标记及其应用。背景技术[0002]玉米(Zeamays)是世界上重要的三大作物之一，作为一种兼具粮食、饲料和生物燃料的多功能作物。在我国，玉米的种植面积广，产量高，已成为我国第一大粮食作物。由镰孢菌(Fusariumspp.)的侵染造成的玉米茎