一株植物乳杆菌CCL67及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103013893A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN103013893A(43)申请公布日2013.04.03(21)申请号201310020435.8C12R1/25(2006.01)(22)申请日2013.01.21(83)生物保藏信息CGMCCNo.69962012.12.17(71)申请人黑龙江八一农垦大学地址163319黑龙江省大庆市高新开发区新阳路2号(72)发明人崔一喆王秋菊杨焕民郭丽王喆(74)专利代理机构大庆市建华专利事务所23119代理人孙薇(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)A23K1/16(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书99页页附图附图22页(54)发明名称一株植物乳杆菌CCL67及其应用(57)摘要本发明涉及一株植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）CCL67，其保藏编号为CGMCCNo.6996。本发明还提供了上述植物乳杆菌CCL67具有抑制鸡肠道中大肠杆菌生长、促进雏鸡生长的作用。本发明从蛋鸡盲肠中分离出植物乳杆菌CCL67，此乳酸杆菌生长旺盛，10小时培养菌数就可达4.7×109cfu/ml，且具有抑菌作用，可以利用培养基生产抑菌蛋白，抑制鸡肠道中大肠杆菌生长；通过此乳酸杆菌制备菌制剂饲喂雏鸡，可以提高雏鸡的生长，该菌株在动物饲养尤其是家禽新型饲料添加剂开发和抗生素替代品研究上具有重大的社会意义和经济价值。CN10389ACN103013893A权利要求书1/1页1.一株植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）CCL67，其保藏编号为CGMCCNo.6996。2.权利要求1所述的植物乳杆菌CCL67具有抑制鸡肠道中大肠杆菌生长、促进雏鸡生长的作用。2CN103013893A说明书1/9页一株植物乳杆菌CCL67及其应用技术领域[0001]本发明属于动物微生物领域，涉及一株植物乳杆菌CCL67及其应用，特别涉及一株从鸡肠道中分离出来的植物乳杆菌CCL67及其应用。背景技术[0002]乳酸菌是一类重要的益生菌，是动物肠道中一类重要的优势菌群。乳酸菌制剂作为一种新型的绿色动物微生态制剂，因其无毒、无抗药性、无残留、无副作用而备受饲料界的广泛关注。[0003]采用乳酸菌作为益生菌饲喂动物，除了由于乳酸菌具有一定的营养作用和对肠道的粘附作用外，主要在于乳酸菌对于一些腐败菌和有害菌具有抑制作用。第一，乳酸菌可以产生乳酸，创造酸性环境抑制有害菌及不耐酸的腐败菌生长；第二，乳酸菌产生H2O2，激活过氧化氢酶—硫氰酸系统，抑制和杀灭革兰氏阴性菌、过氧化氢酶阳性细菌等；第三，部分乳酸菌可以产生抑菌性的细小蛋白质或肽类，称为细菌素，对大肠杆菌等致病菌有拮抗作用。而且，有了产生抑菌蛋白的乳酸菌，就可以生产细菌素，可以替代抗生素，使动物生产更安全。分离筛选可以产生细菌素的乳酸菌成为现在益生菌开发的研究热点。[0004]产生细菌素的乳酸菌来源很多，购买的工业菌株和标准菌株，有很多也可以产生细菌素，环境、土壤、泡菜、酸奶中都可以分离乳酸菌。然而益生菌最后要饲喂动物，那么相对于其他来源的菌株，动物无疑是乳酸菌的最好来源。来自动物肠道的乳酸菌可以适应动物肠道环境，耐受动物的胃酸和胆盐的消化，无疑是最好的益生菌来源。可见，通过从动物肠道分离和筛选能够产生细菌素的乳酸菌将是动物用益生菌筛选的重要研究方向。发明内容[0005]本发明的目的是提供一株植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）CCL67，其保藏编号为CGMCCNo.6996。[0006]本发明的第二个目的是提供上述植物乳杆菌CCL67具有抑制鸡肠道中大肠杆菌生长、促进雏鸡生长的作用。[0007]本发明通过以下技术方案来实现：[0008]一、一株植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）CCL67，其保藏编号为CGMCCNo.6996。[0009]本发明中植物乳杆菌CCL67为革兰氏阳性，形态为杆状，是从笼养成年蛋鸡盲肠内容物中分离的乳酸杆菌菌株，经过产抑菌蛋白等特性测定筛选得到的目标菌株。[0010]筛选的具体步骤如下：[0011]1、乳酸菌分离纯化：[0012]采用无菌操作，用载玻片刮取笼养成年蛋鸡盲肠内容物1g，置于盛有9mL无菌生理盐水的玻璃试管中，充分震荡摇匀，然后吸取0.5mL混合液于盛有4.5mL无菌生理盐水的试管中，此稀释度为10-1，重复以上过程作10倍比稀释，至10-6稀释浓度，选择10-4、10-5、10-63CN103013893A说明书2/9页三个稀释度，吸取0.lmL菌液滴于MRS培养基平板上，平板涂布后采用厌氧培养法（5%CO2）将涂好的培养皿置37℃培养箱培养48h。采用四分