一种循环肿瘤细胞捕获方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114874989A(43)申请公布日2022.08.09(21)申请号202210375256.5(22)申请日2022.04.11(71)申请人中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所地址215000江苏省苏州市工业园区若水路398号(72)发明人索广力熊璇赵喆刘星志(74)专利代理机构苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙)32257专利代理师王玉仙(51)Int.Cl.C12N5/09(2010.01)C12M3/00(2006.01)C12M1/26(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图4页(54)发明名称一种循环肿瘤细胞捕获方法(57)摘要本发明涉及一种循环肿瘤细胞捕获方法，包括以下步骤：将待测细胞液进行红细胞裂解后，加入设置有细胞芯片的培养容器中，细胞芯片包括基体以及阵列在基体表面的盲孔，待细胞进入盲孔中后加入培养基进行培养，培养过程中待测细胞液中的循环肿瘤细胞可增殖成细胞球，加入与循环肿瘤细胞特异性反应的荧光抗体，根据荧光和细胞增殖情况定位循环肿瘤细胞。利用规律排列的微孔、荧光抗体、细胞形态以及增殖情况可以精准鉴定和定位CTC，解决了现有技术中由于部分抗体假阳性造成的干扰从而引起的CTC捕获准确度不高以及CTC活力低的问题。CN114874989ACN114874989A权利要求书1/1页1.一种循环肿瘤细胞捕获方法，其特征在于，包括以下步骤：将待测细胞液进行红细胞裂解后，加入设置有细胞芯片的培养容器中，所述细胞芯片包括基体以及阵列在所述基体表面的盲孔；待细胞进入所述盲孔中后加入培养基进行培养，培养过程中待测细胞液中的循环肿瘤细胞增殖成细胞球，加入与所述循环肿瘤细胞特异性反应的荧光抗体，根据荧光和细胞增殖情况定位所述循环肿瘤细胞；所述培养基为DMEM/F12培养基，所述DMEM/F12培养基还含有5‑15wt％胎牛血清、1‑3wt％青链霉素混合溶液、0.2‑0.8wt％庆大霉素、0.1‑0.3wt％两性霉素B、20‑50ng/mL表皮细胞生长因子、1‑2μML‑谷氨酰胺、2‑30ng/mL胃泌素、80‑180ng/mLWnt3a蛋白、200‑400ng/mLR‑spondin1蛋白、50‑150ng/mLNoggin蛋白、1‑2μMTGFl3受体抑制剂和5‑15mM烟酰胺。2.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞捕获方法，其特征在于：所述TGFl3受体抑制剂为SB43142和/或A83‑01。3.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞捕获方法，其特征在于：所述青链霉素混合溶液中，青霉素的含量为50‑100U/mL，链霉素的含量为0.1‑0.5mg/mL。4.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞捕获方法，其特征在于：所述培养基中还包括0.05‑5wt％的胶原、甲基纤维素或琼脂糖。5.根据权利要求4所述的循环肿瘤细胞捕获方法，其特征在于：所述培养基的粘度为20‑50mPa·s。6.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞捕获方法，其特征在于：加入培养基后在30‑40℃、2‑10％CO2条件下培养5‑10天。7.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞捕获方法，其特征在于：所述细胞芯片的材质为水凝胶。8.根据权利要求7所述的循环肿瘤细胞捕获方法，其特征在于：形成水凝胶的材料选自海藻酸盐、透明质酸、琼脂糖、明胶、胶原、壳聚糖、层黏连蛋白、纤连蛋白、甲基纤维素、弹性蛋白样多肽、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸钠和丙烯酸酯聚合物中的至少一种。9.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞捕获方法，其特征在于：所述细胞芯片经过表面修饰，所述表面修饰的方式为水凝胶涂层修饰、聚乙烯亚胺修饰、聚赖氨酸修饰、多巴胺修饰和等离子处理中的一种。10.根据权利要求9所述的循环肿瘤细胞捕获方法，其特征在于：所述水凝胶涂层为matrigel、琼脂糖、海藻酸盐、透明质酸、明胶、胶原、壳聚糖、层黏连蛋白、纤连蛋白、甲基纤维素、弹性蛋白样多肽、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸钠和丙烯酸酯聚合物中的至少一种物质形成的水凝胶。2CN114874989A说明书1/7页一种循环肿瘤细胞捕获方法技术领域[0001]本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种循环肿瘤细胞捕获方法。背景技术[0002]目前，癌症相关疾病是全球主要的健康问题之一，每年导致约800万人死亡，预计未来这一数字将迅速增加。因此，癌症治疗和早期诊断技术的研发至关重要。近年来，由于现代生物学技术的不断发展，癌症患者主要的诊断和治疗方法正逐渐从传统标准模式转向精准的个性化模式。循环肿瘤细胞(CirculatingTumorCell,CTC)的分离和检测是实现肿瘤病人个性化精准医疗的关键研究领域之一。[0003]CTC是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗