用于猪肉溯源的DNA条形码编制方法及溯源方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105671192A(43)申请公布日2016.06.15(21)申请号201610226723.2(22)申请日2016.04.13(71)申请人上海市农业科学院地址201106上海市闵行区北翟路2901号(72)发明人吴华莉谈永松涂尾龙曹建国(74)专利代理机构上海领洋专利代理事务所(普通合伙)31292代理人刘秋兰(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图1页(54)发明名称用于猪肉溯源的DNA条形码编制方法及溯源方法(57)摘要本发明公开了一种用于猪肉溯源的DNA条形码的编制方法，其包括步骤：1)提取猪个体组织中的基因组DNA；2)以基因组DNA为模板进行PCR扩增，分别使用对应的引物对基因ADAMTS、DAZL、FBXO32、FUT1、MC4R、MyoG、NR4A1分别扩增1个SNP位点、对基因PSMB扩增2个SNP位点，得到不同的扩增片段；3)RFLP分析，将扩增片段分别使用对应的限制性内切酶进行酶切反应，再用琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判定每个片段对应的基因型，并汇编成与所述猪个体对应的DNA条形码。所述DNA条形码多态性信息含量丰富，可用于杜洛克猪、长白猪和大白猪的猪肉溯源。本发明还公开了一种基于所述DNA条形码的猪肉溯源方法。CN105671192ACN105671192A权利要求书1/2页1.一种用于猪肉溯源的DNA条形码编制方法，其特征在于，其包括步骤：1)提取猪个体组织中的基因组DNA；2)以基因组DNA为模板进行PCR扩增，分别使用对应的引物对基因ADAMTS、DAZL、FBXO32、FUT1、MC4R、MyoG、NR4A1分别扩增1个SNP位点、对基因PSMB扩增2个SNP位点，得到不同的扩增片段；3)RFLP分析，将扩增片段分别使用对应的限制性内切酶进行酶切反应，再用琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判定每个片段对应的基因型，并汇编成与所述猪个体对应的DNA条形码。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，PCR扩增使用的引物序列分别为，ADAMTS：上游引物序列5′-TGGGGAGATTGTTCCAGAAC-3′，下游引物序列5′-CTGCAGAACGAAGAAGTAGCC-3′；DAZL：上游引物序列5′-CGACAGGAATGAGTTTAGCAA-3′，下游引物序列5′-CCAAAATGGAAGGGAAAAGT-3′；FBXO32：上游引物序列5′-ATCCCTGAGTGGCATTGCCCAA-3′，下游引物序列5′-TTCAGCTGCTGCTGCCAGTG-3′-3′；FUT1：上游引物序列5′-CTTCAGCCAGGGCTCCTTTAAG-3′，下游引物序列5′-CTTCCTGAACGTCTATCAAGACC-3′；MC4R：上游引物序列5′-ATGAACTCAACCCATCACC-3′，下游引物序列5′-TTAATATCTGCTAGACAAATCACAG-3′；MyoG：上游引物序列5′-TCAGGAAGAACTGAAGGCTG-3′，下游引物序列5′-GTTTCCTGGGGTGTTGC-3′；NR4A1：上游引物序列5′-TTCCTCTGGGTCACAACG-3′，下游引物序列5′-CTCACAGAGTCAATGCCG-3′；PSMB的两个SNP位点对应引物序列分别为PSMB(1FR)：上游引物序列5′-AGTTAAGCTCAGTCGTGCAG-3′，下游引物序列5′-TGAAGTGGATCTTTTCGCAG-3′；PSMB(2FR)：上游引物序列5′-AGCTGCGAAAAGATCCACTT-3′，下游引物序列5′-GGTCTTCTAGCACTGCCAGG-3′。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中，酶切反应所用的限制性内切酶分别为：ADAMTS：PvuⅡ；DAZL：MspⅠ；FBXO32：SnaBⅠ；FUT1：HhaⅠ；MC4R：ClaⅠ；MyoG：MspⅠ；NR4A1：DdeⅠ；PSMB(1FR)：Eco81Ⅰ；PSMB(2FR)：Eco72Ⅰ。2CN105671192A权利要求书2/2页4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中，PCR扩增条件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，52～64℃退火30s，72℃延伸30s，共30～40个循环；最后72℃延伸10min。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，各个基因PCR扩增对应的退火温度为：6.一种基于DNA条形码的猪肉溯源的方法，其特征在于，包括步骤：1)在饲养阶段采用权利要求1所述的方法编制猪群中每个猪个体对应的DNA条形码，将每个猪个体的DNA条形码和来源信息一