一种甲基营养型芽孢杆菌B18及其液体制剂和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107858304A(43)申请公布日2018.03.30(21)申请号201711191144.XA01P3/00(2006.01)(22)申请日2017.11.24C12R1/07(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNo.146412017.09.18(71)申请人四川农业大学地址611130四川省成都市温江区惠民路211号(72)发明人李姝江方馨玫朱天辉黎肇家徐永强谯天敏韩珊(74)专利代理机构北京众合诚成知识产权代理有限公司11246代理人夏艳(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)权利要求书1页说明书5页A01N63/02(2006.01)序列表1页附图1页(54)发明名称一种甲基营养型芽孢杆菌B18及其液体制剂和应用(57)摘要本发明公开了一种甲基营养型芽孢杆菌B18及其液体制剂和应用，该菌株已经于2017年9月18日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.14641。以甲基营养型芽孢杆菌B18为菌种，经种子培养、发酵培养可制备得到液体制剂。本发明生防菌甲基营养型芽孢杆菌B18菌株具有防病、促生双重功能，兼有生物防治和生物肥料特点，对防治杜仲猝倒病和杜仲促生具有显著的效果，不仅能避免化学药物所造成的污染环境的严重后果，而且具有可持续、成本低的特点。CN107858304ACN107858304A权利要求书1/1页1.一种甲基营养型芽孢杆菌B18，其特征在于，该菌株已于2017年9月18日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.14641。2.根据权利要求1所述的一种甲基营养型芽孢杆菌B18，其特征在于，所述的甲基营养型芽孢杆菌B18的16SrDNA的序列为：SEQIDNO:1。3.一种以甲基营养型芽孢杆菌B18为活性成分的液体制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)一级斜面种子：制作牛肉膏蛋白胨斜面培养基，接种甲基营养型芽孢杆菌后，培养制成一级种子；2)二级液体种子：营养肉质培养液经高压灭菌后，在通氧控制下置于三角瓶中，在无菌状态接种甲基营养型芽孢杆菌斜面种子，振荡培养，制成甲基营养型芽孢杆菌液体种子；3)液体发酵：营养肉质培养液经高压灭菌后，在通氧控制下置于三角瓶中，在无菌状态接种甲基营养型芽孢杆菌液体种子，接种量为液体总体积的10％，振荡培养，制成甲基营养型芽孢杆菌液体制剂，然后保存。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的牛肉膏蛋白胨斜面培养基为：牛肉膏7g，蛋白胨10g，NaCL5g，琼脂18g，水1000mL。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的营养肉质培养液为：牛肉膏7g，蛋白胨10g，NaCL5g，杜仲须根浸渍液1000mL。6.权利要求3所述制备方法制备得到的以甲基营养型芽孢杆菌B18活性成分的液体制剂。7.根据权利要求6所述的液体制剂，其特征在于，所述的液体制剂含活芽孢数不低于1×108cfu/g。8.权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌B18在防治杜仲猝倒病或杜仲促生中的应用。9.权利要求6所述的液体制剂在防治杜仲猝倒病或杜仲促生中的应用。2CN107858304A说明书1/5页一种甲基营养型芽孢杆菌B18及其液体制剂和应用技术领域[0001]本发明属于微生物技术领域，涉及种甲基营养型芽孢杆菌B18及其液体制剂的制备和在杜仲猝倒病、促生上的应用。背景技术[0002]杜仲，属于杜仲科杜仲属多年生落叶乔木，该科仅有1属1种植物，是我国仅存的第三纪孑遗植物，属国家二级保护名贵经济树种，还是我国特产树种和著名药材。杜仲有近千年的栽培历史，实用型极强，在我国亚热带至温带的27个省均可种植，主要产于四川、云南、贵州、湖南、湖北、陕西、江苏及浙江等省。杜仲被列为贵州地道中药材GAP基地示范品种之一。它全身都是宝，用途广泛，具有极大的药用价值和经济价值。杜仲被成为神奇之树，其叶、雄花、果实和树皮都含有许多人体不可缺少的活性物质，这些活性物质具有十分独特的医疗保健功能，在促进体内胶原蛋白的合成、抗衰老、降血压、抗疲劳、人体免疫调节、预防细胞癌变、降低血脂和胆固醇、治疗心脑血管疾病，补肝肾等方面有独特的功效，并且无毒副作用树皮可以入药，有滋补肝肾、强健筋骨、治疗腰膝痛和高血压等功效。树皮、叶和果实还能提取杜仲胶(又名硬橡胶)，可代替橡胶用，是世界上十分珍贵的优质天然橡胶资源。还可以加工成各种优质饮料。另外，杜仲的木材纹理直行、结构细致，不翘不裂，是制造家具和其他木制品的优质材料。目前国内外市场需求量大，皮、叶价格逐渐上涨。[0003]猝倒病常在杜仲苗期发生，对其生长危害极大。在低温、高温、土壤粘重和排水不良的苗圃地或阴雨天易发病。病