杜梨中钠、氢逆向转运蛋白PbrNHX2及其在提高植物耐盐能力中的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108250281A(43)申请公布日2018.07.06(21)申请号201810196311.8A01H6/82(2018.01)(22)申请日2018.03.09A01H6/74(2018.01)(71)申请人南京农业大学地址210000江苏省南京市玄武区卫岗1号(72)发明人黄小三张绍铃邢才华刘月赵梁怡胡轼李凌高俊芝姚征宏(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569代理人刘奇(51)Int.Cl.C07K14/415(2006.01)C12N15/29(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12N15/82(2006.01)A01H5/00(2018.01)权利要求书1页说明书12页序列表5页附图6页(54)发明名称杜梨中钠、氢逆向转运蛋白PbrNHX2及其在提高植物耐盐能力中的应用(57)摘要本发明提供了杜梨中钠、氢逆向转运蛋白PbrNHX2及其在提高植物耐盐能力的应用，属于基因工程技术领域。本发明提供了杜梨中钠、氢逆向转运蛋白、编码基因及用于克隆所述编码基因cDNA序列的引物对。所述的杜梨中钠、氢逆向转运蛋白、所述的编码基因或所述的引物对克隆的编码基因对在提高植物耐盐能力中的应用。构建烟草转化载体和秋子梨转化载体，获得的阳性植株苗进行盐处理，发现阳性植株苗的电导率较野生型显著降低，叶绿素含量较野生型显著升高，成活率比野生型显著提高，同时阳性植株苗比野生型有更强的抗ROS的能力。过表达的编码基因能够有效的增强转基因植株的活性氧清除能力，从而提高了植株的耐盐性。CN108250281ACN108250281A权利要求书1/1页1.杜梨中钠、氢逆向转运蛋白PbrNHX2，其特征在于，具有如序列表中SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。2.权利要求1所述的杜梨中钠、氢逆向转运蛋白PbrNHX2的编码基因，其特征在于，具有如序列表中SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。3.一种用于克隆权利要求2所述编码基因cDNA序列的引物对，包括正向引物和反应引物，其特征在于，所述正向引物具有如序列表中SEQIDNO.3所示的核苷酸序列；所述反向引物具有如序列表中SEQIDNO.4所示的核苷酸序列。4.权利要求1所述的杜梨中钠、氢逆向转运蛋白PbrNHX2、权利要求2所述的编码基因或权利要求3所述的引物对在提高植物耐盐能力中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：将权利要求1所述的杜梨中钠、氢逆向转运蛋白PbrNHX2或权利要求2所述的编码基因或权利要求3所述的引物对克隆的编码基因在植物中重组表达，得到具有耐盐性的重组植物。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述克隆的程序为94℃预变性3min；94℃变性30s，58℃退火90s，72℃延伸90s，35个循环，循环完成后72℃延伸10min。7.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述植物包括烟草或秋子梨。8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述重组植物的耐盐性能以盐浓度表示，所述盐浓度为不高于1000mmol/L。9.根据权利要求4或8所述的应用，其特征在于，所述盐包括Na+或K+。2CN108250281A说明书1/12页杜梨中钠、氢逆向转运蛋白PbrNHX2及其在提高植物耐盐能力中的应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，具体涉及杜梨中钠、氢逆向转运蛋白PbrNHX2及其在提高植物耐盐能力中的应用。背景技术[0002]梨是世界上主栽的果树树种之一。梨树在中国的种植分布非常广泛，梨主要产区布局为“三区四点”，从东北到广西，从云南到山东均有梨树的种植。梨优势产区的布局与规划极大的促进了我国梨产业的发展，但正是因为分布广泛，所以其很容易受到各种环境因素的的影响，如干旱，涝害，盐碱等。因此，是否能培育出优良的抗逆新品种便成为了梨产业发展最至关重要的因素。因为梨的育种存在：遗传背景复杂，童期长、自交不亲和、育种目标不可确定性等原因，使得常规的育种方法已经远远不能满足现代梨种植的品种需求。所以，如何在短时间内培育出能用于生产的梨抗逆新品种，便成为了摆在育种学家面前的一道难题。随着生物技术与组织培养技术的快速进步，植物的育种又有了新的途径，如组织培养技术育种，遗传转化育种，体细胞杂交等方法。利用植物基因工程技术对植物的性状进行改良，使得梨抗逆新品种的高效准确培育成为了可能。[0003]盐胁迫对植物造成的伤害最开始表现为渗透胁迫，并且会持续在植物的生长周期存在；紧接着是因为离子失调引起的毒害和营养元素的缺失；最后导致氧化胁迫造成膜透性的改变及生理代谢的紊乱和有毒物质的积累，最终致使植物的生长发育受到阻碍和影响，甚至死亡(Flowers,2004