一种假鬼伞属真菌在促进杜鹃兰种子萌发中的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110352659A(43)申请公布日2019.10.22(21)申请号201910662716.0(22)申请日2019.07.22(71)申请人贵州大学地址550025贵州省贵阳市花溪区花溪大道南段(72)发明人张明生高燕燕田莉刘思佳彭思静(74)专利代理机构北京联创佳为专利事务所(普通合伙)11362代理人张梅(51)Int.Cl.A01C1/00(2006.01)A01N63/04(2006.01)A01P21/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种假鬼伞属真菌在促进杜鹃兰种子萌发中的应用(57)摘要本发明提供了一种假鬼伞属真菌在促进杜鹃兰种子萌发中的应用，所述假鬼伞属真菌为小脆柄菇菌。小脆柄菇菌促进杜鹃兰种子萌发的方法包括如下步骤：（1）用假鬼伞属小脆柄菇菌和杜鹃兰种子作为共生萌发材料；（2）配置共生萌发培养基；（3）对杜鹃兰种子消毒灭菌；（4）在共生萌发培养基中接种小脆柄菇菌和杜鹃兰种子，进行共培养。本发明通过从野生杜鹃兰成年植株根中分离得到一株假鬼伞属小脆柄菇菌株，与杜鹃兰种子共培养过程中能有效促进杜鹃兰种子萌发。CN110352659ACN110352659A权利要求书1/1页1.一种假鬼伞属真菌在促进杜鹃兰种子萌发中的应用。2.根据权利要求1所述的假鬼伞属真菌在促进杜鹃兰种子萌发中的应用，其特征在于：所述假鬼伞属真菌为小脆柄菇菌。3.一种假鬼伞属真菌促进杜鹃兰种子萌发的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）活化小脆柄菇菌株作为共生萌发材料；（2）配置共生萌发培养基；（3）对杜鹃兰种子消毒灭菌；（4）在共生萌发培养基中接种小脆柄菇菌株和杜鹃兰种子，进行共培养。4.根据权利要求3所述的假鬼伞属真菌促进杜鹃兰种子萌发的方法，其特征在于：所述步骤（1）活化小脆柄菇菌株的方法是：将保存于3.5-4.5℃的小脆柄菇菌株取出，接种到PDA培养基上，置于24-26℃的人工气候箱内培养6-8d取出，作为共生萌发材料。5.根据权利要求1所述的假鬼伞属真菌促进杜鹃兰种子萌发的方法，其特征在于：所述步骤（2）中共生萌发培养基为燕麦粉琼脂培养基（OMA）；配置完成后在118-124℃下灭菌20min，得共生萌发培养基。6.根据权利要求5所述的假鬼伞属真菌促进杜鹃兰种子萌发的方法，其特征在于：所述燕麦粉琼脂培养基的燕麦粉含量为4g/L，琼脂的含量为8g/L。7.根据权利要求1所述的假鬼伞属真菌促进杜鹃兰种子萌发的方法，其特征在于：所述步骤（3）的过程是将成熟杜鹃兰蒴果表面经75%乙醇消毒30s，无菌水冲洗3次，然后拨开果壳，取出种子用无菌滤纸包裹，经75%乙醇消毒30s，无菌水冲洗3次，再经1%次氯酸钠消毒3min，无菌水冲洗5次。8.根据权利要求1所述的假鬼伞属真菌促进杜鹃兰种子萌发的方法，其特征在于：所述步骤（4）是将共生萌发培养基倒入无菌培养皿，待其凝固后，在表面铺上中央有孔的无菌滤纸，再用无菌棉签蘸取种子均匀涂布于滤纸上，将共生萌发材料的菌丝接种于滤纸中央孔中，用封口膜将培养皿封好，在22℃的培养箱中培养。9.根据权利要求8所述的假鬼伞属真菌促进杜鹃兰种子萌发的方法，其特征在于：所述步骤（4）是将冷却至40-50℃的共生萌发培养基倒入直径9cm的无菌培养皿，每皿倒入18-22mL，待其凝固后，在表面铺上中央有孔的无菌滤纸，再用无菌棉签蘸取种子均匀涂布于滤纸上，再将共生萌发材料的菌丝接种于滤纸中央孔中，用封口膜将培养皿封好，在22℃的培养箱中培养。10.根据权利要求1所述的假鬼伞属真菌促进杜鹃兰种子萌发的方法，其特征在于：所述假鬼伞属真菌的分离获得方法：以野生杜鹃兰健康根为材料，经75%乙醇表面消毒30s后，再经1%次氯酸钠消毒3min，无菌水冲洗5次，再将无菌根置于预先灭菌的研钵中，加入1mL无菌水研磨后，吸取100μL研磨液涂布于查氏培养基，待菌丝长出后，挑取菌丝至PDA培养基纯化。2CN110352659A说明书1/5页一种假鬼伞属真菌在促进杜鹃兰种子萌发中的应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，涉及一种假鬼伞属真菌在促进杜鹃兰种子萌发中的应用。背景技术[0002]兰科植物种类众多，全世界已报道的约有26000种，广泛分布于各种陆地生态系统中。由于多数兰科植物种子的胚未发育成熟，无胚乳，无法为种子萌发提供足够的营养物质，其种子萌发可通过非共生萌发培养和共生萌发培养两种方式。[0003]杜鹃兰[Cremastraappendiculata(D.Don)Makino]为兰科（Orchidaceae）杜鹃兰属（Cremastra）多年生珍稀药用草本植物，以干燥假鳞茎入药，因其假鳞茎具有清热解毒、活血化瘀、抗肿