临床微生物学和微生物学检验.pptx

抗菌药物敏感性试验教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生实验课时：4学时课程类型：专业实验课课程要求：必修每组人数：2人实验目的和要求实验内容一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍二、纸片扩散法（K-B法）方法：菌液制备：挑取孵育16-24h的血平板上数个菌落置于生理盐水管中校正浓度至0.5麦氏标准；涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液在试管壁旋转挤去多余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次每次旋转平板60º最后沿平板内缘涂抹1周；贴含药纸片：平板在室温下干燥3-5min用无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面各纸片中心相距应大于24mm纸片距平板内缘应大于15mm；孵育：35ºC16-18h量取抑菌圈直径。结果判读：用刻度尺量取抑菌圈直径根据CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）标准判读结果；报告：细菌对该抗生素是敏感（susceptibleS）；耐药（resistantR）；还是中介（intermediateI）。表1金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果三、肉汤稀释法方法：试管编号：取26只试管排成两排（测试菌排质控菌排）每排13支编号。另取3支试管分别标记上“肉汤对照”、“测试菌生长对照”和“质控菌生长对照”等对照。抗菌药物稀释：用MH肉汤倍比稀释抗菌药物至13管稀释后使每管含抗菌药物稀释液2ml。肉汤对照、测试菌生长对照、质控菌生长对照管：分别加入MH肉汤2ml。方法：菌液制备：生理盐水校正测试菌和质控菌至0.5麦氏比浊标准再用MH肉汤稀释到107CFU/ml；加菌液：用微量加样器取0.1ml稀释菌液由低到高加于各排试管中其最终的接种量为5×105CFU/ml。测试菌排、测试菌生长对照管加测试菌液；质控菌排、质控菌生长对照管加质控菌液。孵育：35ºC24h观察结果。