梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN101858915A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CNCN101858915101858915A(43)申请公布日2010.10.13(21)申请号201010179121.9(22)申请日2010.05.19(71)申请人厦门大学附属中山医院地址361004福建省厦门市思明区湖滨南路201-209号(72)发明人张忠英杨天赐林丽蓉张长弓(74)专利代理机构厦门南强之路专利事务所35200代理人马应森(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/532(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/571(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法(57)摘要梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法，涉及一种梅毒特异性IgG抗体检测试剂。提供一种可用于全血、血清、血浆及脑脊液等标本中梅毒特异性IgG抗体检测的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法。试剂条设有载体板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜、梅毒特异性IgG抗体检测线、对照线和吸收垫。制备梅毒重组抗原TPN17和TPN47硝酸纤维素膜的点样；制备胶体金；胶体金与TPN17、TPN47的标记；制备免疫层析检测条。检测所需标本量极小，不需要特殊仪器，肉眼直接判读结果，且检测简便快速，特异性强，灵敏度较高，准确可靠，成本较低，应用广泛。CN10859ACN101858915ACCNN110185891501858916A权利要求书1/2页1.梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条，其特征在于设有载体板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜、梅毒特异性IgG抗体检测线、对照线和吸收垫；加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一端设在胶体金垫的一端上，胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设在硝酸纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgG抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体，在对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体。2.如权利要求1所述的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条，其特征在于所述载体板为PVC板。3.如权利要求1所述的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)制备梅毒重组抗原TPN17和TPN47采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表达，得梅毒重组抗原TPN17和TPN47；2)硝酸纤维素膜的点样在硝酸纤维素膜IgG检测线上包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体，在对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47IgG抗体，晾干；3)制备胶体金采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金，取1％氯金酸1mL加入到100mL去离子双蒸水中，得到的氯金酸浓度为0.01％，置于带冷凝装置的烧瓶中加热至沸腾，磁力加热搅拌下加入1％柠檬酸三钠水溶液2.0mL，继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止，冷却后置于棕色瓶中4℃冰箱保存备用；4)胶体金与TPN17、TPN47的标记胶体金与梅毒特异性抗原TPN17的标记：取胶体金10ml，用0.1mol/LNaOH调至pH5.4，加100μgTPN17，混匀，放置5min，加入5％BSA1ml混匀，4℃、10000r/min离心1h，弃上清，将沉淀用TBS缓冲液溶解至10ml，4℃、10000r/min离心1h，弃上清，沉淀用TBS稀释至1ml，得胶体金标记的TPN17抗原；胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作，得胶体金标记的TPN47抗原；将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合后，均匀地涂于玻璃纤维膜上，烘干，制备成胶体金垫；5)制备免疫层析检测条将加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一端设在胶体金垫的一端上，胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设在硝酸纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgG抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体，在对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体，用切条机切成条状，得梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条。4.如权利要求3所述的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体的浓度为1～4mg/mL。2CCNN110185891501858916A权利要求书2/2页5.如权