梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102095859A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102095859A(43)申请公布日2011.06.15(21)申请号201110027421.X(22)申请日2011.01.25(71)申请人厦门大学附属中山医院地址361004福建省厦门市思明区湖滨南路201-209号(72)发明人林丽蓉刘莉莉张忠英杨天赐(74)专利代理机构厦门南强之路专利事务所35200代理人马应森(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/571(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/535(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒及其制备方法(57)摘要梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒及其制备方法，涉及一种试剂盒。试剂盒设有载体板、硝酸纤维膜、梅毒特异性总抗体检测线、对照线，梅毒特异性总抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性总抗体检测线处包被梅毒特异性重组抗原，在对照线处包被人总抗体；辣根过氧化物酶标记抗人Ig抗体。先制备梅毒特异性重组抗原，再硝酸纤维素膜的点样，然后制备抗人Ig单克隆抗体，在标记抗人Ig单克隆抗体的辣根过氧化物酶后制备免疫印迹试剂盒。可用于全血、血清、血浆及脑脊液等标本中梅毒特异性总抗体的检测。该检测方法所需的标本量极小，不需要特殊仪器，且检测简便快速，特异性强，灵敏度高，准确可靠，成本低，应用广泛。CN102958ACCNN110209585902095867A权利要求书1/1页1.梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于设有载体板、硝酸纤维膜、梅毒特异性总抗体检测线、对照线，梅毒特异性总抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性总抗体检测线处包被梅毒特异性重组抗原，在对照线处包被人总抗体；辣根过氧化物酶标记抗人Ig抗体。2.如权利要求1所述的梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于所述梅毒特异性重组抗原为TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、TPN47。3.如权利要求1所述的梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒，其特征在于所述载体板采用PVC板。4.如权利要求1所述的梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)制备梅毒特异性重组抗原采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表达，得梅毒特异性重组抗原；2)硝酸纤维素膜的点样在硝酸纤维素膜总检测线上包被梅毒特异性重组抗原，在对照线处包被人Ig抗体，晾干；3)制备抗人Ig单克隆抗体以人Ig为抗原免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术，筛选获得稳定分泌抗人Ig单克隆抗体的杂交瘤细胞株；4)抗人Ig单克隆抗体的辣根过氧化物酶标记采用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记；5)制备免疫印迹试剂盒将硝酸纤维膜粘贴在载体板上表面，梅毒特异性总抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性总抗体检测线处包被梅毒特异性重组抗原，在对照线处包被人Ig抗体，用切条机切成条状，和酶标记的抗人Ig抗体及其底物共同组装成梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒。5.如权利要求4所述的梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，其特征在于在步骤1)、2)、5)中，所述梅毒特异性重组抗原为TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、TPN47。6.如权利要求4所述的梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述梅毒特异性重组抗原和人总抗体的浓度为1～4mg/mL；点样量为1μL/cm。7.如权利要求4所述的梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，其特征在于在步骤3)中，采用ELISA的方法鉴定McAb效价在1∶107以上。8.如权利要求4所述的梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述辣根过氧化物酶的底物由0.03％(W/V)的过氧化氢和0.07％(W/V)的二氨基联苯胺组成。2CCNN110209585902095867A说明书1/6页梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种试剂盒，尤其是涉及一种梅毒特异性总抗体免疫印迹试剂盒及其制备方法。背景技术[0002]梅毒(Syphilis)是一种由梅毒螺旋体(Treponemapallidum，TP)引起的性传播性疾病，其病原体是梅毒螺旋体，属螺旋体科。梅毒螺旋体主要通过性接触、输血、创口或者胎盘等途径传播。梅毒螺旋体从感染区附近的淋巴结进入血液，播散全身，使机体几乎所有的组织及器官受累，临床表现为全身性，可分为不同临床阶段，包括一期、二期、三期和潜伏期。世界卫生组织(WHO)曾乐观地预言：“由于有高敏度检测方法和高效的