一种杨梅快速繁殖的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103651144103651144A(43)申请公布日2014.03.26(21)申请号201310711176.3(22)申请日2013.12.20(71)申请人常熟理工学院地址215500江苏省苏州市常熟市南三环路99号(72)发明人姜波沈宗根吕洪飞郁达(74)专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350代理人汤东凤(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)A01G17/00(2006.01)权利要求书2页权利要求书2页说明书6页说明书6页(54)发明名称一种杨梅快速繁殖的方法(57)摘要本发明公开了一种杨梅快速繁殖的方法，包括以下步骤：1)外植体的选取；2）外植体消毒；3)初始诱导培养；4)愈伤组织诱导；5）分化和增殖培养；6)生根培养。按上述方法繁殖杨梅既有效解决杨梅组织培养中外植体污染率高的问题，又可实现杨梅组培苗的大量快速繁殖。CN103651144ACN103654ACN103651144A权利要求书1/2页1.一种杨梅快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的杨梅枝条为外植体，剪去叶片后剪成2-3cm的茎段；2）外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20-25KHZ超声波清洗中保持温度30-35℃处理30-45min，然后以自来水冲洗10-20min；随后在超净工作台上以70-75%的酒精消毒25-35秒，0.1％升汞溶液中处理5-7分钟，然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养皿备用；3)初始诱导培养：将灭菌后外植体茎段各剪去2-3mm，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强2500-3500Lx、光周期10-14h/d,温度25℃±2℃；培养4-6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：WPM+6-BA0.1-0.2mg/L+NAA0.01-0.02mg/L+PVP5-10mg/L；4)愈伤组织诱导：取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15-20d，条件为暗培养，温度20℃±2℃；所述愈伤组织培养基为：MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.02-0.5mg/L+PVP5-10mg/L；5）分化和增殖培养：将透明无色的愈伤组织块放入分化培养基中培养20-25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度25℃±2℃；所述分化和增殖培养用培养基为：WPM+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP5-10mg/L；6)生根培养：将5）步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养15-20d后生根，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度25℃±2℃；所述生根用培养基为：1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+PVP5-10mg/L；7）炼苗和移栽：将有生根的杨梅幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25℃，湿度85%-95%，适当遮荫即可；所述的WPM培养基配方为：大量元素：硝酸铵NH4NO3400mg/L，硫酸钾K2SO4900mg/L，磷酸二氢钾KH2PO3170mg/L，硫酸镁MgSO4·7H2O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl2·2H2O96mg/L；四水合硝酸钙Ca(NO3)2·4H2O556mg/L；微量元素：硼酸H3BO36.2mg/L，硫酸锰MnSO4·4H2O22.5mg/L，硫酸锌ZnSO4·7H2O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，硫酸铜CuSO4·5H2O0.25mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA37.3mg/L，硫酸亚铁FeSO4·7H2O27.8mg/L；有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L；所述的MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO31900mg/L，硝酸铵NH4NO31650mg/L，磷酸二氢钾KH2PO3170mg/L，硫酸镁MgSO4·7H2O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl2·2H2O440mg/L；微量元素：碘化钾KI0.83mg/L，硼酸H3BO36.2mg/L，硫酸锰MnSO4·4H2O22.3mg/L，硫酸锌ZnSO4·7H2O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，硫酸铜CuSO4·5H2O0.025mg/L，氯化钴CoCl2·6H2O0.025m