一种基于SSR标记筛选以蜡杨梅为砧木嫁接杨梅接穗的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106854677A(43)申请公布日2017.06.16(21)申请号201710038332.2(22)申请日2017.01.19(71)申请人浙江省农业科学院地址310021浙江省杭州市江干区笕桥镇石桥路139号(72)发明人梁森苗戚行江张淑文郑锡良任海英(74)专利代理机构杭州千克知识产权代理有限公司33246代理人黎双华向庆宁(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)权利要求书7页说明书17页附图1页(54)发明名称一种基于SSR标记筛选以蜡杨梅为砧木嫁接杨梅接穗的方法(57)摘要本发明公开了一种基于SSR标记筛选以蜡杨梅为砧木嫁接杨梅接穗的方法，包括以下步骤：(1)选取不同品种的杨梅及蜡杨梅砧木枝条，每一品种和砧木各取样2份以上，提取其DNA；(2)选取已发表的127对SSR引物对步骤(1)提取的DNA进行PCR扩增，电泳检测、银染显色，检测不同杨梅枝条与蜡杨梅砧木的DNA间的位点多态率；(3)选取与蜡杨梅DNA位点多态率最低的杨梅枝条作为最佳接穗，以蜡杨梅为砧木嫁接该接穗。本发明经过大量实验发现位点多态率与嫁接成活率SR间是显著性负相关，即多态率越高，SR越低。因此选取位点多态率最低的杨梅枝条作为最佳接穗，其嫁接成活率最高，适用作为盐碱地的经济树种。CN106854677ACN106854677A权利要求书1/7页1.一种基于SSR标记筛选以蜡杨梅为砧木嫁接杨梅接穗的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)选取不同品种的杨梅及蜡杨梅砧木枝条，每一品种和砧木各取样2份以上，提取其DNA；(2)选取127对SSR引物对步骤(1)提取的DNA进行PCR扩增，电泳检测、银染显色，检测不同杨梅枝条与蜡杨梅砧木的DNA间的位点多态率；(3)选取与蜡杨梅DNA位点多态率最低的杨梅枝条作为最佳接穗，以蜡杨梅为砧木嫁接该接穗。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中，提取DNA的方法为CTAB方法。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述127对SSR引物的序列如下表所示SSR引物的序列2CN106854677A权利要求书2/7页3CN106854677A权利要求书3/7页4CN106854677A权利要求书4/7页5CN106854677A权利要求书5/7页6CN106854677A权利要求书6/7页7CN106854677A权利要求书7/7页8CN106854677A说明书1/17页一种基于SSR标记筛选以蜡杨梅为砧木嫁接杨梅接穗的方法技术领域[0001]本发明涉及一种基于SSR标记筛选以蜡杨梅为砧木嫁接杨梅接穗的方法。背景技术[0002]杨梅(MyricarubraSieb.etZucc.)是中国南方的一种重要的经济作物，距今已有7000年的栽培历史(Jiaoetal.2012)，适合生长在弱酸性的土壤中。2016年浙江全省杨梅面积134.1万亩，产量52.4万吨，产值46.2亿元，其中最著名的两个栽培种是‘荸荠种’和‘东魁’。中国杨梅种类主要包括以下四类：M.rubra，M.esculenta，M.nana和M.adenophora。其他的杨梅种类还有：M.cerifera，M.faya和M.rivas-martinezii(Jiaetal.2015)。Myricacerifera是一种常绿的雌雄异株的植物，多年生灌木，枝干高度可达6米，通常生长在美国东南部沿海地区(Radfordetal.1968)。蜡杨梅果实为单粒种子的核果，果实小，直径4mm，被蜡质类的物质覆盖表面，因此而得名。果实在初秋时节成熟(Ericksonetal.2003)。它与固氮菌(Frankiasp.)共生，可以生长在较为贫瘠的沙质土地上(Youngetal,1992)。盐胁迫是一种影响各类作物生长和产出的非生物胁迫(ShrivastavaandKumar2015)。世界范围内，20％的可耕作土地和33％的可灌溉农业用地均受到高盐害的影响(Panwaretal.2016)。土地盐碱化以每年10％的速度快速增长，预计到2050年盐碱地面积能够达到全部耕地面积的50％(ShrivastavaandKumar2015)。鉴定新型的适应盐碱地的植物可作为一种有效利用盐碱地的方法。以蜡杨梅为砧木以达到高效利用盐碱地的目的。嫁接是一种在果树上广泛应用的农艺技术(Ostendorpetal.2016)。选取具有耐盐碱性，抗病性等品种做为砧木，可以达到提高作物的产量和品质的目的。[0003]SSR标记是遗传多样性分析，聚类分析，遗传图谱构建和种质鉴定的首选标记，因为它具有高多态性、共显性及可重复性等特点。SSR标记已被多种果树利用以构建遗传图谱，例如：胡桃