一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110526890A(43)申请公布日2019.12.03(21)申请号201910873498.5(22)申请日2019.09.17(71)申请人湖北省农业科学院中药材研究所地址445000湖北省恩施土家族苗族自治州恩施市学院路253号(72)发明人何美军李宇黄东海艾伦强方诗琪张宇廖璐婧(51)Int.Cl.C07D311/32(2006.01)C07D311/40(2006.01)G01N24/08(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法(57)摘要本发明提供了一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法，通过利用硅胶柱色谱及半制备高效液相从藤茶组织中分离、纯化二氢杨梅素，利用LC-HR-ESIMS、1D和2DNMR波谱数据分析，鉴定其结构分别为(+)Dihydromyricetin(60.5mg)，通过HPLC检测分析化合物的纯度≥98％。本发明解决高效、经济地从藤茶老叶、残次叶中分离、纯化和鉴定(+)Dihydromyricetin(1)活性单体化合物的方法，充分利用藤茶老叶、残次叶，避免藤茶资源浪费，创造巨大经济效益，有利于促进藤茶产业发展。CN110526890ACN110526890A权利要求书1/1页1.一种从藤茶组织中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于步骤如下：a.收集藤茶老叶、残次叶，乙醇超声粗提取总黄酮类化合物；b.按步骤a取得粗黄酮浸膏利用正相硅胶柱色谱分离，得到含有目标活性成分的组分；c.将含有目标活性成分的组分用半制备高效液相分离纯化得到活性化合物的单体；d.依据利用LC-HR-ESIMS、1D和2DNMR波谱数据解析目标化合物的单体结构。2.按照权利要求1所述的一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法，其特征在于步骤b将总黄酮提取浸膏与100-200目正相硅胶等量混合拌样，5倍质量300-400目正相硅胶装柱，编号A柱，用溶剂石油醚、乙酸乙酯、甲醇洗脱，洗脱程序按照：A-1,A-2至A-7，其中A柱洗脱程序为：洗脱体积：为5倍柱体积，A-1洗脱组分100％石油醚；A-2洗脱组分80％石油醚，20％乙酸乙酯；A-3洗脱组分50％石油醚，50％乙酸乙酯；A-4洗脱组分20％石油醚，80％乙酸乙酯；A-5洗脱组分100％乙酸乙酯；A-6洗脱组分80％乙酸乙酯，20％甲醇；A-7洗脱组分50％乙酸乙酯，50％甲醇；将所述含有目标活性化合物的组分A-6与100-200目正相硅胶等量混合拌样，5倍质量300-400目正相硅胶装柱，编号B柱，用溶剂氯仿、甲醇洗脱，洗脱程序按照：B-1,B-2至B-7，其中B柱洗脱程序为：洗脱体积：为5倍柱体积，B-1洗脱组分100％氯仿；B-2洗脱组分98％氯仿，2％甲醇；B-3洗脱组分96％氯仿，4％甲醇；B-4洗脱组分94％氯仿，6％甲醇；B-5洗脱组分92％氯仿，8％甲醇；B-6洗脱组分90％氯仿，10％甲醇；B-7洗脱组分80％氯仿，20％甲醇；将含有目标活性化合物的组分B-3、B-4与300-400目反相硅胶等量混合拌样，10倍质量300-400目反相硅胶装柱，编号C柱，用溶剂丙酮、水洗脱，洗脱程序按照：C-1,C-2至C-8，其中C柱洗脱程序为：洗脱体积：为5倍柱体积，C-1洗脱组分10％丙酮，90％水；C-2洗脱组分20％丙酮，80％水；C-3洗脱组分30％丙酮，70％水；C-4洗脱组分40％丙酮，60％水；C-5洗脱组分50％丙酮，50％水；C-6洗脱组分60％丙酮，40％水；C-7洗脱组分70％丙酮，30％水；C-8洗脱组分80％丙酮，20％水。3.按照权利要求1所述的一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法，其特征在于步骤C将所述将含有目标活性化合物的组分C-3,用岛津高效液相C18反相柱分离纯化：A相：85％H2O、15％乙腈、0.1％乙酸，B相：15％H2O、85％乙腈、0.1％乙酸，流速为2.5ml/min，洗脱程序按：Time：0.01min，A相72％，B相28％；Time：23min，A相72％，B相28％；Time：28min，A相0％，B相100％；Time：27min，A相0％，B相100％；Time：27.1min，A相72％，B相28％；Time：30min，stop；检测波长270nm，28％B相等度洗脱得到化合物二氢杨梅素：Rt＝12.5min。4.一种二氢杨梅素的鉴定方法，其特征在于二氢杨梅素活性化合物结构的MS、1HNMR谱、13CNMR谱、DEPT135NMR谱鉴定：化合物二氢杨梅素的[M+H]+321.1，鉴定为二氢杨梅素(+)Dihydromyricetin单