一种梅花配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110927312A(43)申请公布日2020.03.27(21)申请号201911222670.7(22)申请日2019.12.03(71)申请人广东一方制药有限公司地址528000广东省佛山市南海区里水镇旗峰工业开发区(72)发明人魏梅李国卫吴文平何民友潘礼业孙冬梅陈向东程学仁(74)专利代理机构广州一锐专利代理有限公司44369代理人杨昕昕董云(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/34(2006.01)G01N30/86(2006.01)权利要求书2页说明书13页附图3页(54)发明名称一种梅花配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法(57)摘要本发明涉及一种梅花配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法，所述的梅花配方颗粒的成分含量测定方法，包括如下步骤：（1）分别吸取对照品溶液和待测梅花配方颗粒样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定相应峰面积；（2）通过外标法计算金丝桃苷的含量；（3）再通过一测多评法计算绿原酸、异槲皮苷、芦丁的含量。本发明通过优化色谱条件及供试品的制备，采用外标法计算出了金丝桃苷的含量，再通过一测多评法计算绿原酸、异槲皮苷、芦丁的含量，能有效简化这4种成分的含量测定的操作步骤，减少测定时间，提高了工作效率，实现了对梅花配方颗粒化学成分的定性和定量分析。CN110927312ACN110927312A权利要求书1/2页1.一种梅花配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包含如下步骤：（1）精密称取梅花配方颗粒粉末，制备得到梅花配方颗粒供试品溶液；（2）将梅花配方颗粒供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到梅花配方颗粒UPLC特征图谱。2.根据权利要求1所述的梅花配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为30~50℃，以甲醇为流动相A，以0.05~0.15%的磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.2~0.3ml/min，检测波长为330~380nm，进样量为0.5~2μl。3.根据权利要求2所述的梅花配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：0~10min，流动相A的体积分数为13%，流动相B的体积分数为87%；10~11min，流动相A的体积分数变化为13%~21%，流动相B的体积分数变化为87%~79%；11~35min，流动相A的体积分数变化为21%~23%，流动相B的体积分数变化为79%~77%；35~43min，流动相A的体积分数变化为23%~40%，流动相B的体积分数变化为77%~60%；43~45min，流动相A的体积分数变化为40%~100%，流动相B的体积分数变化为60%~0%；45~47min，流动相A的体积分数为100%，流动相B的体积分数为0%；47~47.1min，流动相A的体积分数变化为100%~13%，流动相B的体积分数变化为0%~87%；47.1~55min，流动相A的体积分数为13%，流动相B的体积分数为87%。4.根据权利要求1所述的梅花配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述的供试品溶液的制备方法为：取梅花配方颗粒，研细，取0.05~0.15g，精密称定，精密加入50~90%甲醇15~50mL，称定重量，超声处理15~60分钟，取出，放冷，用50~90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤膜滤过，即得。5.一种梅花配方颗粒的成分含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）分别吸取对照品溶液和待测梅花配方颗粒样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定相应峰面积；（2）通过外标法计算金丝桃苷的含量；（3）再通过一测多评法计算绿原酸、异槲皮苷、芦丁的含量。6.根据权利要求5所述的梅花配方颗粒的成分含量测定方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备方法为：分别取绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、芦丁对照品，置10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配制成质量浓度为750~850、60~100、80~100、80~100μg/mL的对照品溶液，即得。7.根据权利要求5所述的梅花配方颗粒的成分含量测定方法，其特征在于，所述待测梅花配方颗粒样品溶液的制备方法为：取梅花配方颗粒，研细，取0.05~0.15g，精密称定，精密加入50~90%甲醇15~50mL，称定重量，超声处理15~60分钟，取出，放冷，用50~90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤膜滤过，即得。8.根据权利要求5所述的梅花配方颗粒的成分含量测定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为30~50℃