睡莲花粉离体培养和活力测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103396981A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103396981103396981A(43)申请公布日2013.11.20(21)申请号201310269064.7(22)申请日2013.07.01(71)申请人镇江瑞繁农艺有限公司地址212400江苏省镇江市句容市华阳镇宁杭路112号(72)发明人孙春青潘跃平戴忠良马志虎孙国胜(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司32200代理人楼高潮(51)Int.Cl.C12N5/04(2006.01)C12Q1/02(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书2页说明书2页(54)发明名称睡莲花粉离体培养和活力测定方法(57)摘要本发明公开了一种睡莲花粉离体培养和活力测定方法，包括以下步骤:1）配制由蔗糖、硼酸、硝酸钾、氯化钙、聚乙二醇激素和睡莲花柱头盘上的蜜液混合的液体培养基；2）七月下旬睡莲花开时节，早晨采集盛开的睡莲花花粉；3）将液体培养基滴在载玻片上，将少量睡莲花粉蘸到液体培养基中，在在25℃的黑暗环境下培养；4）载玻片培养6小时后，置于光学显微镜下观察发芽状况，从而测定睡莲花粉活力。本发明的睡莲花粉离体培养方法科学合理，睡莲花粉活力测定方法简单、可操作性强，数据可靠，并可完全实现定量检测，对于提高睡莲育种效率具有较高的实际应用价值。CN103396981ACN103968ACN103396981A权利要求书1/1页1.一种睡莲花粉离体培养和活力测定方法，其特征在于：包括以下步骤:1）配制液体培养基按下列组分配制液体培养基：300g/L的蔗糖、10mg/L的硼酸、350mg/L的硫酸镁、900mg/L硝酸钾、800mg/L氯化钙和100g/L植物激素PEG1500，其余为睡莲花柱头盘上的蜜液；2）睡莲花粉采集七月下旬睡莲花开时节，早晨10:00采集盛开的睡莲花花粉，将睡莲花粉装入离心管中，避光备用；3）睡莲花粉培养将液体培养基滴在载玻片上，用毛笔将少量睡莲花粉蘸到液体培养基中，不覆盖载玻片，播种后将载玻片置于垫有湿润滤纸的培养皿内，在黑暗环境下培养；4）睡莲花粉活力测定载玻片培养6小时后，置于光学显微镜下观察发芽状况，能观察到已萌发睡莲花粉，所述已萌发睡莲花粉的花粉管长度大于花粉直径。2.如权利要求1所述的睡莲花粉离体培养和活力测定方法，其特征在于：所述步骤3）的培养温度为24～26℃。2CN103396981A说明书1/2页睡莲花粉离体培养和活力测定方法技术领域[0001]本发明涉及一种花粉离体培养的方法，特别涉及一种离体培养方法，还涉及睡莲花粉的活力测定方法，属于植物杂交育种技术领域。背景技术[0002]睡莲是睡莲科睡莲属(Nymphaea)植物的泛称，以其丰富的花色、圣洁的寓意及茎叶对水中富营养物和有害物质的强吸附能力，深受人们的喜爱，被广泛应用于园林水景中。[0003]不同品种的睡莲花粉活力测定可以区分被测品种睡莲花粉的成活率，对指导睡莲育种具有重要理论和现实意义。有多种方法可以测定花粉的活力，其中花粉离体萌发可以直观地观察到死亡或缺乏生活力的花粉，测定的数据科学可靠，并完全定量。对于许多植物来说，花粉离体萌发都与结实和种子形成具有相关性，故花粉离体萌发测定仍为目前杂交育种中花粉生活力测定的首选方法。离体萌发法测定花粉活力需要特定的培养基和培养条件，培养基的主要成分一般包括Ca2＋、硼和碳源等，有的植物还需要其他物质如植物激素6-BA或PEG等。目前，未见睡莲花粉离体萌发的培养基和培养条件的报道。发明内容[0004]本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种睡莲花粉离体培养方法，实现睡莲花粉离体萌发测定。[0005]本发明通过以下技术方案予以实现：一种睡莲花粉离体培养和活力测定方法，包括以下步骤:1）配制液体培养基按下列组分配制液体培养基：300g/L的蔗糖、10mg/L的硼酸、350mg/L的硫酸镁、900mg/L硝酸钾、800mg/L氯化钙和100g/L植物激素PEG1500，其余为睡莲花柱头盘上的蜜液；2）睡莲花粉采集七月下旬睡莲花开时节，早晨10:00采集盛开的睡莲花花粉，将睡莲花粉装入离心管中，避光备用；3）睡莲花粉培养将液体培养基滴在载玻片上，用毛笔将少量睡莲花粉蘸到液体培养基中，不覆盖载玻片，播种后将载玻片置于垫有湿润滤纸的培养皿内，在黑暗环境下培养；4）睡莲花粉活力测定载玻片培养6小时后，置于光学显微镜下观察发芽状况，能观察到已萌发睡莲花粉，所述已萌发睡莲花粉的花粉管长度大于花粉直径。[0006]前述的睡莲花粉离体培养和活力测定方法，其中所述步骤3）的培养温度为24～26℃。3CN103396981A说明书2/2页[0007]本发明相对于现有技术具有以下