一种利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105360168A(43)申请公布日2016.03.02(21)申请号201510896540.7(22)申请日2015.12.07(71)申请人井冈山大学地址343000江西省吉安市青原区学苑路28号(72)发明人周兵(74)专利代理机构厦门市精诚新创知识产权代理有限公司35218代理人方惠春(51)Int.Cl.A01N63/04(2006.01)A01P13/02(2006.01)C12N1/14(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图2页(54)发明名称一种利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法(57)摘要本发明公开了一种利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法，包括液体培养基的制备、链格孢菌培养、链格孢菌毒素的制备和链格孢菌毒素的应用，将制备的活性毒素配制成浓度为125～2000μg/mL的混合液，喷洒在空心莲子草上，在3天内使空心莲子草表现出明显的毒害症状，并杀死杂草，同时对大多数空心莲子草共生杂草具有毒杀效果。本发明方法液体培养操作简单、培养基质材料易获得、所需设备简单，所用毒素稳定性强，提取纯化工艺简单，可大批量生产；助剂对毒素具有较强的增效作用，以毒素作茎叶喷施，使用方便，既可有效杀灭目标杂草空心莲子草，同时也可兼顾杀灭大多数共生杂草，具有较高的环境安全性。CN105360168ACN105360168A权利要求书1/1页1.一种利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)液体培养基的制备①先采集新鲜的空心莲子草茎叶，冲洗干净，阴干去除茎叶表面的水分，剪碎成1～2cm的碎片，取200g，加适量的水，煮沸后，继续煎煮22～28min，经两层纱布过滤，得空心莲子草煎液；②添加葡萄糖20g，加水定容至1000mL；③分装至500mL三角瓶，每瓶300mL，在0.1MPa压力下灭菌24～26min；(2)链格孢菌培养在灭菌后的液体培养基中转接3块直径为0.8～1.2cm的链格孢菌饼于液体培养基中；培养温度为25±1℃，光照为L/D＝12:12，摇床振荡培养，转速为110rpm/min，培养时间为5～7d；(3)链格孢菌毒素的制备将培养后菌液经减压抽滤得滤液，滤液经大孔吸附树脂吸附，然后用体积浓度为90％的洗脱剂洗脱得洗脱液，并浓缩得棕色浸膏；浸膏经柱层析分离得活性毒素；(4)链格孢菌毒素的应用将分离的活性毒素加入水中进行配制，配制成浓度为125～2000μg/mL的混合液，并加入助剂，混合均匀后，喷洒在空心莲子草上，在3天内使空心莲子草表现出明显的毒害症状，并杀死共生杂草。2.根据权利要求1所述的利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇中的一种或两种混合物。3.根据权利要求1所述的利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的助剂为表面活性剂、植物源助剂、增效剂和渗透剂的混合物，提高链格孢菌毒素对空心莲子草3～5倍的植物毒性。4.根据权利要求3所述的利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法，其特征在于，所述助剂为十二烷基苯磺酸钠、曲拉通X-100、硝酸铵、有机硅、司班-60、农乳HSH437、农乳0201B、农乳1602、农乳8205中的多种混合物。2CN105360168A说明书1/7页一种利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法技术领域[0001]本发明涉及微生物应用于农业植物保护的技术领域，具体是一种利用致病真菌防治外来杂草空心莲子草的方法。背景技术[0002]空心莲子草是我国广泛分布的外来入侵杂草之一，其生命力强，生长繁殖迅速，扩散快，能够入侵多种生境，危害当地的生物多样性，造成农作物减产，影响农事作业，污染水体，堵塞水道，影响了淡水养殖和农田灌溉，发展成为我国许多地区的恶性杂草。2003年被列入国家环保总局公布的“中国第一批外来入侵生物名单”。空心莲子草的防治主要包括物理防治、化学防治和生物防治。物理防治可短时间内产生较好的防除效果，但因空心莲子草具有较强的克隆繁殖特性，只要有1个茎节其就能繁殖，因此采用常规的机械除草和翻耕方法，只会将其切成更多的茎段，从而催生更多的新植株，不利于防除。化学防治在一定程度上对控制空心莲子草发挥了积极作用，但一些除草剂只能杀死地上部分，而对地下部分却没有效果，且大量化学除草剂的使用必将对环境和人类健康产生一定的负面影响。因此，开展生物防治是目前空心莲子草防治最具潜力的和开发前景的方法。其中，利用天敌昆虫及病原菌进行防治是目前空心莲子草生物防治的主要方法，而利用病原菌进行防治的方法目前还处于防治物筛选阶段。发明内容[0003]本发明的目的在于提供一种利用致病真菌防治外来