一种铁线莲属植物直接不定芽离体发生的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108207621A(43)申请公布日2018.06.29(21)申请号201611192858.8(22)申请日2016.12.21(71)申请人中国科学院上海生命科学研究院地址200031上海市徐汇区岳阳路319号(72)发明人朱木兰奉树成刘航(74)专利代理机构上海一平知识产权代理有限公司31266代理人王正君马思敏(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称一种铁线莲属植物直接不定芽离体发生的方法(57)摘要本发明提供了一种铁线莲属植物直接不定芽离体发生的方法，具体地，本发明提供了一种铁线莲属植物的繁殖方法，包括步骤：(a)将所述铁线莲属植物的茎段无菌培养获得带腋芽的茎段；(b)切除所述步骤(a)获得的茎段的腋芽后进行诱导培养，长出不定芽；(c)对所述步骤(b)获得的不定芽进行培养，生根获得植株。本发明首次以铁线莲属植物无菌萌发的茎段为起始外植体，进行离体繁殖，不经过愈伤组织形成阶段的直接诱导不定芽发生,并经过再生芽苗的伸长、生根及移栽成苗后，可获得大量再生植株表型一致性高、遗传稳定性好的铁线莲属植物。CN108207621ACN108207621A权利要求书1/1页1.一种铁线莲属植物的繁殖方法，其特征在于，包括步骤：(a)将所述铁线莲属植物的茎段无菌培养获得带腋芽的茎段；(b)切除所述步骤(a)获得的茎段的腋芽后，将所述茎段进行诱导培养，长出不定芽；和(c)对所述步骤(b)获得的不定芽进行培养，生根获得植株。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中，将所述茎段置于含0.1-10mg/LBA和0.01-1mg/LNAA的ML培养基上，于23±1℃无菌培养，所述茎段萌发获得所述带腋芽的茎段。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)中，所述诱导培养是指在含0.1-10mg/LBA和0.01-5mg/LNAA的ML培养基上培养所述茎段。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(c)包括步骤：(c1)对所述步骤(b)获得的不定芽进行诱导培养至不定芽伸长分节；和(c2)分离步骤(c1)获得的伸长分节的不定芽，继续培养至生根获得植株。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(c1)中将所述不定芽置于含0.1-20mg/LBA、0.01-5mg/LNAA、和0.01-10mg/LGA3的ML培养基中，于23±1℃进行培养。6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(c2)中将伸长分节的不定芽置于含0.5-30mg/LIBA的ML培养基中进行预培养。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(c2)中，伸长分节的不定芽在ML培养基中预培养3-5天后，切除形态学下端茎段，在含0.01-5mg/LIBA的1/2MS培养基中继续培养。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将步骤c)获得的植株进行炼苗后，移植入栽培土中培养的步骤。9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述铁线莲属植物选自下组：铁线莲、芹叶铁线莲、阔叶铁线莲、或其组合。10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤a)前对所述种子进行消毒的步骤。2CN108207621A说明书1/7页一种铁线莲属植物直接不定芽离体发生的方法技术领域[0001]本发明涉及铁线莲属植物栽培领域，具体涉及一种铁线莲属植物直接不定芽离体发生的方法。背景技术[0002]铁线莲属(Clematis)为多年生木质或草质藤本，或为直立灌木或草本，全世界约300种，分布于热带及亚热带地区，我国约有108种，全国各地都有分布。铁线莲属植物兼具药用与观赏功能，植株含有三萜皂苷、生物碱、香豆素、木脂素和黄酮类化学成分，具有抗菌、消炎、抗肿瘤和镇痛等药理作用。其花型多样，色彩缤纷，素有“藤本皇后”的美誉，现有的栽培品种600余种，在城市园林中已有应用，深受家庭园艺爱好者的推崇。铁线莲可点缀于围墙、栅栏、棚架或作绿篱，在日本和欧美等国家被广泛用于庭园中，相比之下目前我国铁线莲属植物在园林中的应用不多，引种栽培的范围也较小。目前国内市场销售的铁线莲栽培种类多来自欧洲，没有我国自主产权的品种，同时，许多国外品种在栽培过程中不能适应江南地区夏季湿热气候，出现枝叶大量枯萎的情况，严重影响了观赏效果。国内有关铁线莲属植物育种及繁殖技术的报道很少，仅涉及东北铁线莲、钝萼铁线莲等少数几种。[0003]目前国内对铁线莲属植物的研究主要集中在种质资源调查、系统分类研究和栽培繁殖等方面。铁线莲属植物存在结实少或萌发时间长、发芽率低等问题，不宜采用有性繁殖，园林栽培应用受到限制。[0004]通常情况下，铁线莲属直接