用于生产丝纺丝液的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102812036A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102812036A(43)申请公布日2012.12.05(21)申请号201080042791.4(51)Int.Cl.(22)申请日2010.08.25C07K1/14(2006.01)C07K1/30(2006.01)(30)优先权数据C07K1/34(2006.01)61/237,1562009.08.26US61/315,8122010.03.19US(85)PCT申请进入国家阶段日2012.03.26(86)PCT申请的申请数据PCT/AU2010/0010952010.08.25(87)PCT申请的公布数据WO2011/022771EN2011.03.03(71)申请人联邦科学工业研究组织地址澳大利亚首都特区(72)发明人T·D·萨瑟林V·S·阿里托A·西斯卡塔S·韦斯曼M·G·胡森J·S·丘奇(74)专利代理机构北京戈程知识产权代理有限公司11314代理人程伟韩文华权利要求书权利要求书33页页说明书说明书3232页页序列表序列表9999页页附图附图44页页(54)发明名称用于生产丝纺丝液的方法(57)摘要本发明涉及生产包含具有卷曲螺旋结构的丝蛋白如蜜蜂丝蛋白的丝纺丝液的方法。所述丝蛋白从生产它们的细胞中获得，通过采用表面活性剂或离子液体接触它们使所述蛋白溶解并且浓缩所述蛋白来生产丝纺丝液。所述蛋白质能够用于多种用途如个人护理用品、塑料、纺织物和生物医学产品的生产。CN102836ACN102812036A权利要求书1/3页1.一种用于生产丝纺丝液的方法，所述方法包含i）裂解生产一种或多种丝蛋白的细胞，ii）通过采用表面活性剂或离子液体接触它们使所述丝蛋白溶解，和iii）浓缩所述丝蛋白来生产丝纺丝液，其中所述一种或多种丝蛋白能够形成包含卷曲螺旋结构的三级结构。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述丝蛋白被浓缩，通过a）通过加入沉淀所述表面活性剂的化合物来减少溶液中所述表面活性剂的量，和b）从在步骤a）中形成的所述沉淀中分离包含所述丝蛋白的溶液以生产所述丝纺丝液。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述沉淀表面活性剂的化合物是盐或碳水化合物；或其两种或多种的组合。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述盐是钾盐或钠盐。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述丝蛋白通过过滤被浓缩。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述丝蛋白通过膜过滤被浓缩。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述膜过滤是正切流动过滤。8.根据权利要求1至7任一项所述的方法，其进一步包含增加所述丝纺丝液中丝蛋白的浓度。9.根据权利要求8所述的方法，其包含所述丝纺丝液对抗脱水溶液的滤膜分析。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述脱水溶液包含吸湿性聚合物。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述吸湿性聚合物选自聚乙二醇、淀粉酶和丝胶，或其两种或多种的组合。12.根据权利要求1至11任一项所述的方法，其中所述丝纺丝液包含至少大约0.5%w/v的丝蛋白。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述丝纺丝液包含大约0.5%至大约15%w/v的丝蛋白。14.根据权利要求1至13任一项所述的方法，其中所述细胞是细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、植物细胞或动物细胞，或其两种或多种的组合。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述细胞是细菌细胞。16.根据权利要求1至15任一项所述的方法，其中步骤i）进一步包含从已裂解的细胞中分离包涵体。17.根据权利要求1至16任一项所述的方法，其进一步包含在步骤i）之前培养所述细胞。18.根据权利要求1至17任一项所述的方法，其中所述丝蛋白能够形成包含卷曲螺旋结构的三级结构的部分包含至少10个七肽序列abcdefg的拷贝，并且其中处于位置a和d上的至少25%的氨基酸是丙氨酸残基。19.根据权利要求1至18任一项所述的方法，其中所述丝蛋白包含序列，所述序列选自：a）如SEQIDNO1、3、5、7、17、19、21、23、33、35、37、39、49、51、53、55、65、67、69、71、81、83、85、87或97中任何一个所提供的氨基酸序列，b）与SEQIDNO1、3、5、7、17、19、21、23、33、35、37、39、49、51、53、55、65、67、69、71、81、2CN102812036A权利要求书2/3页83、85、87或97中任何一个或多个至少30%相同的氨基酸序列，和c）a）或b）的生物学活性片段。20.根据权利要求1至19任一项所述的方法，其中所述丝蛋白包含第一丝蛋白，其包含a）如SEQIDNO1、17、33、49、65或81中任何一个所提供的氨基酸序列；b）与SEQIDNO1、17、33、49、65或81中任