中红侧沟茧蜂MmedCOⅠ基因及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105861512A(43)申请公布日2016.08.17(21)申请号201510033226.6(22)申请日2015.01.22(71)申请人中国农业科学院植物保护研究所地址100193北京市海淀区圆明园西路2号中国农科院植保所(72)发明人王山宁张永军郑瑶彭勇路子云郭予元(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君(51)Int.Cl.C12N15/12(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/68(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表3页附图1页(54)发明名称中红侧沟茧蜂MmedCOⅠ基因及其应用(57)摘要本发明涉及拟寄生物检测领域，具体提供了中红侧沟茧蜂MmedCOⅠ基因序列(如SEQIDNo.1所示)，且基于该序列设计了针对该序列的特异性扩增引物，并提供了一种快速检测中红侧沟茧蜂寄生棉铃虫幼虫的分子水平的方法，有利于实现快速准确统计寄生蜂产卵量或寄主幼虫寄生率，该发明能在寄主幼虫被寄生24小时后有效的检测出寄主幼虫被寄生的情况，缩减了检测时间，同时避免了因寄主幼虫不正常死亡造成的统计误差，提高了统计的准确性。CN105861512ACN105861512A权利要求书1/1页1.中红侧沟茧蜂MmedCOⅠ基因，其特征在于，所述MmedCOⅠ基因的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。2.用于扩增权利要求1所述基因核心片段的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物为：MmedCOI-F：5'-ATTCGTTTGGAATTAGGTATACCAGGTAG-3'；MmedCOI-R：5'-ACAGTTCATCCAGTTCCAACACCAAC-3'。3.一种快速检测中红侧沟茧蜂寄生棉铃虫幼虫的方法，其特征在于，所述方法利用权利要求2所述的特异性引物对棉铃虫幼虫组织中的DNA进行PCR扩增，通过检测是否得到扩增产物，判断棉铃虫幼虫是否被中红侧沟茧蜂寄生。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将棉铃虫幼虫用组织研磨器充分研磨，提取组织中全部DNA；(2)以上述DNA为模板，利用权利要求2所述的特异性引物，进行PCR反应；(3)取PCR反应扩增产物，通过琼脂糖凝胶电泳检测；(4)根据电泳条带中是否出现中红侧沟茧蜂MmedCOⅠ基因片段的特征条带，判断棉铃虫幼虫是否被中红侧沟茧蜂寄生。5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述PCR反应的反应条件为：94℃预变性4min；94℃变形30s，58℃退火30s，72℃延伸45s，40个循环；72℃终延伸5min。6.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述PCR反应的反应体系为25μL体系：灭菌水17.25μL，10×EasyTaqbuffer2.5μL，dNTPs(2.5mM)2μL，MmedCOI-F引物1μL，MmedCOI-R引物1μL，基因组DNA1μL，EasyTaqDNA聚合酶0.25μL。7.权利要求1所述的中红侧沟茧蜂MmedCOⅠ基因在鉴定中红侧沟茧蜂中的应用。8.权利要求1所述的中红侧沟茧蜂MmedCOⅠ基因在计算中红侧沟茧蜂寄生棉铃虫寄生率中的应用。9.含有权利要求2所述特异性引物的检测试剂盒。2CN105861512A说明书1/4页中红侧沟茧蜂MmedCOⅠ基因及其应用技术领域[0001]本发明涉及拟寄生物检测领域，具体地说，涉及一种中红侧沟茧蜂MmedCOⅠ基因及其应用。背景技术[0002]中红侧沟茧蜂Microplitismediator(Haliday)是一种幼虫寄生蜂，其寄主范围广泛，涉及鳞翅目夜蛾科和尺蛾科等40多种昆虫，包括棉铃虫(Helicoverpaarmigera)、粘虫(Mythimnaseparata)和小地老虎(Agrotisypsilon)等重大农业害虫，在害虫综合治理策略中扮演着重要的角色。中红侧沟茧蜂在田间对寄主幼虫具有较高的寄生效果，调查发现中红侧沟茧蜂对棉铃虫各世代的平均自然寄生率可达22.9％。[0003]在寄生蜂寄生行为研究中，寄生蜂寄生寄主幼虫的寄生率是研究的重要内容，通常采用传统的统计方法计算寄生率，即记录寄主幼虫被寄生蜂寄生后寄生蜂的结茧情况。[0004]然而这种方法需要将寄主幼虫持续饲养直至寄生蜂结茧，从而增加了调查时间和成本。另外，寄生蜂在寄主幼虫体内需要发育较长的时间，寄主幼虫在发育过程中的不正常死亡，最终会影响统计结果。发明内容[0005]为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种中红侧沟茧蜂细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(MmedCOⅠ)及其应用。[0006]为了实现本发明目的，本发明首先提供中红侧沟茧蜂MmedCOⅠ基因