一种高效表达的猪圆环病毒2型Cap‑穿膜肽融合蛋白基因及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107841507A(43)申请公布日2018.03.27(21)申请号201711177363.2A61K39/12(2006.01)(22)申请日2017.11.23A61P31/20(2006.01)(71)申请人南京农业大学地址211225江苏省南京市溧水区白马镇国家农业科技园南京农业大学基地(72)发明人姜平白娟朱雪娇董彦鹏王先炜(74)专利代理机构南京天华专利代理有限责任公司32218代理人徐冬涛李晓峰(51)Int.Cl.C12N15/62(2006.01)C12N15/866(2006.01)C12N7/01(2006.01)C07K19/00(2006.01)权利要求书2页说明书13页序列表7页附图8页(54)发明名称一种高效表达的猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因及其应用(57)摘要本发明公开一种高效表达的猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因及其应用，该融合蛋白的编码基因为(1)～(3)中的任意一种：(1)融合穿膜肽TAT基因序列的Cap基因；(2)融合穿膜肽ppTG20基因序列的Cap基因；(3)融合蜜蜂信号肽HBM基因序列的Cap基因。本课题组研究发现，穿膜肽与pVAX-Cap质粒混合制备的DNA疫苗能提高其在小鼠体内的免疫应答水平。本研究将TAT、ppTG20，HBM与PCV2Cap蛋白N端融合，成功构建重组杆状病毒，实现了Cap蛋白有效表达，为PCV2基因工程疫苗研究奠定了基础。CN107841507ACN107841507A权利要求书1/2页1.一种猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因，其特征在于：该基因为(1)～(3)中的任意一种：(1)融合穿膜肽TAT基因序列的Cap基因；(2)融合穿膜肽ppTG20基因序列的Cap基因；(3)融合蜜蜂信号肽HBM基因序列的Cap基因。2.根据权利要求1所述的猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因，其特征在于：所述融合穿膜肽TAT基因序列的Cap基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述融合穿膜肽ppTG20基因序列的Cap基因的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述融合蜜蜂信号肽HBM基因序列的Cap基因的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。3.根据权利要求1或2所述的猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因，其特征在于：所述融合穿膜肽TAT基因序列的Cap基因的制备过程为：根据穿膜肽TAT基因序列TATGGCAGGAAGAAGCGGAGACAGCGACGAAGA和pVax-cap中Cap基因序列，设计引物TAT-cap-F，5’-CGCTCGAGATGTATGGCAGGAAGAAGCGGAGACAGCGACGAAGAATGACCTACCCCC-3’，Cap-R，5’-CGGGTACCTCAATGGTGATGGTGATGATGCTTGGGGTTCAGGG-3’，以重组质粒pVax-cap为模板，扩增得到TAT-cap基因；所述融合穿膜肽ppTG20基因序列的Cap基因的制备过程为：根据穿膜肽ppTG20基因序列GGTCTGTTCCGAGCACTGCTGCGACTGCTGCGATCTCTGTGGCGACTGCTGCTGCGAGCA和pVax-cap中Cap基因序列，设计引物ppTG20-cap-F1，5’-CGCTCGAGATGGGTCTGTTCCGAGCACTGCTGCGACTGCTGCGATCTCTGTGGCGACT-3’，ppTG20-cap-F2，5’-CTGCTGCGATCTCTGTGGCGACTGCTGCTGCGAGCAATGACCTACCCCCGCCGCCG-3’，Cap-R，5’-CGGGTACCTCAATGGTGATGGTGATGATGCTTGGGGTTCAGGG-3’，以重组质粒pVax-cap为模板，两次PCR扩增得到ppTG20-cap基因；所述融合蜜蜂信号肽HBM基因序列的Cap基因的制备过程为：根据蜜蜂信号肽HBM基因序列ATGAAATTCTTAGTCAACGTTGCCCTTGTTTTTATGGTCGTATACATTTCTTACATCTATGCGGATCGA和pVax-cap中Cap基因序列，设计引物HBM-cap-F1，5’-CGCTCGAGATGAAATTCTTAGTCAACGTTGCCCTTGTTTTTATGGTCGTATAC-3’，HBM-cap-F2，5’-TTTATGGTCGTATACATTTCTTACATCTATGCGGATCGAATGACCTACCCCCGCCGCCG-3’，Cap-R，5’-CGGGTACCTCAATGGTGATGGTGATGATGCTTGGGGTTCAGGG-3’，以重组质粒pVax-cap为模板，