预览加载中,请您耐心等待几秒...
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲,该文档总共11页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~

如果您无法下载资料,请参考说明:

1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109161479A(43)申请公布日2019.01.08(21)申请号201810930984.1A01P21/00(2006.01)(22)申请日2018.08.15(71)申请人延安大学地址716000陕西省延安市宝塔区圣地路580号(72)发明人邓振山(74)专利代理机构北京君泊知识产权代理有限公司11496代理人王程远(51)Int.Cl.C12N1/00(2006.01)C12P1/00(2006.01)A01N63/00(2006.01)A01N43/22(2006.01)A01P3/00(2006.01)权利要求书2页说明书8页(54)发明名称一种防治苹果树腐烂病的药物及其制备方法(57)摘要本发明涉及果树医药领域,具体涉及一种防治苹果树腐烂病的药物及其制备方法,所述药物包括主剂和辅料,所述主剂包括从苹果树中分离得到的有病原拮抗作用的内生菌发酵液及芸苔素内酯,辅料包括蜂蜡、食用油和吐温20。制备时,称取蜂蜡在恒温磁力搅拌器上进行磁力搅拌,待蜂蜡彻底溶化后加入食用油继续磁力搅拌;充分混匀后缓慢加入主剂继续搅拌,缓慢加入吐温20充分混合均匀后停止加热,边搅拌边冷却,随着温度降低,不断提高转速,制得成品药物。本发明药物对苹果腐烂病原菌具有较强的抑制作用、伤口组织可快速愈合,且成本低、可操作性强。CN109161479ACN109161479A权利要求书1/2页1.一种防治苹果树腐烂病的药物,其特征在于,包括苹果树中分离得到的对苹果树腐烂病有病原拮抗作用的内生菌发酵液,所述内生菌获得方法如下:将果园中无腐烂病的健康苹果树的茎叶和果实用70%酒精浸泡3-5s,然后用1.0%次氯酸钠消毒10-20min,再用无菌水冲洗3-5次;再次进行表面消毒处理并用无菌水漂洗3-5次,将最后一次冲洗液作为对照涂布于平板以检测表面消毒是否彻底;取表面消毒彻底的茎叶组织和苹果,将茎叶组织切成小块,将苹果果实部分在灭菌后的研钵中研磨成汁,无菌操作下分别接种在灭菌后的PDA固体培养基中,28℃无菌培养48h,然后采用平板划线法将组织块周围长出的菌落进行分离纯化,得到苹果内生菌;采用平板对峙法,测定经过分离纯化后的内生菌对苹果腐烂病病原菌的抑菌活性:将活化后的苹果腐烂病病原菌菌落用打孔器打成直径为6mm的菌饼,置于PDA平板中央,用同样的方法在距其2cm处接种已经分离纯化的内生菌,每个平板接四个菌饼,在28℃下培养;以只接种苹果腐烂病病原菌的平板为对照,每处理做3个重复;待对照平板上长满菌丝时,测量菌落直径,计算菌落生长抑制率,菌株生长抑制率=(对照组菌落直径-处理组菌落直径)/对照组菌落直径×100%;采用平板对峙法,从苹果树茎部、根部、叶片中分离的56株侯选菌株中,筛选12株有一定抑菌活性的内生菌,其中对苹果腐烂病菌的抑菌活性最强2个菌株命名为菌株T-07和T-09,选择这2株菌株作为最终的供试菌株;采用平板对峙法探究所筛选的内生菌菌株T-07和T-09之间的拮抗性能,结果表明内生菌菌株T-07和T-09之间没有明显拮抗作用,可以混合使用,且混合后两者相互协同,抑制效果比单独菌株更好。2.根据权利要求1所述的药物,其特征在于:所述内生菌发酵液经过离心和乙酸乙酯萃取。3.根据权利要求2所述的药物,其特征在于:还包括生长素类物质,所述生长素类物质和内生菌发酵液混合形成主剂。4.根据权利要求3所述的药物,其特征在于:所述生长素类物质为芸苔素内酯。5.根据权利要求4所述的药物,其特征在于:还包括辅料,所述辅料包括蜂蜡、食用油和吐温20。6.根据权利要求5所述的药物,其特征在于:按重量比,蜂蜡45-55份,食用油15-25份,芸苔素内脂0.1-0.3份,内生菌发酵液7-9份,吐温20为40-60份。7.根据权利要求6所述的药物,其特征在于:按重量比,蜂蜡50份,食用油20份,芸苔素内脂0.2份,内生菌发酵液7.8份,吐温20为50份。8.一种权利要求6或7任一项所述防治苹果树腐烂病的药物的制备方法,其特征在于,包括:(1)制备主剂,按照权利要求1所述制备内生菌菌株,制备内生菌发酵液,并与芸苔素内酯混合形成主剂;(2)称取蜂蜡置于烧杯中,在恒温磁力搅拌器上进行磁力搅拌,控制温度60-67℃,转速75-80r/min,并保持10min,使蜂蜡溶化,待蜂蜡彻底溶化后,停止加热,待容器内温度降至30℃-40℃时,按比例加入食用油继续搅拌;(3)边搅拌边观察混合物状态,再缓慢加入吐温20,充分混合均匀后停止加热,边搅拌2CN109161479A权利要求书2/2页边冷却至15℃,将其充分混匀后缓慢加入主剂,使之混合成为最终的膏状物,即制得成品药物。9.根据权利要求8所述的制备方法,其特征