斑点叉尾鮰爱德华氏病疫苗的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102370975A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102370975A(43)申请公布日2012.03.14(21)申请号201010255403.2A61P31/04(2006.01)(22)申请日2010.08.17C12R1/01(2006.01)(83)生物保藏信息CCTCCNO:M20101912010.07.30(71)申请人广西壮族自治区水产研究所地址530021广西壮族自治区南宁市青山路8号(72)发明人梁万文黄婷李莉萍陈福艳张彬雷爱莹王瑞(74)专利代理机构广西南宁明智专利商标代理有限责任公司45106代理人黎明天(51)Int.Cl.A61K39/02(2006.01)C12N1/20(2006.01)权利要求书1页说明书2页(54)发明名称斑点叉尾鮰爱德华氏病疫苗的制备方法(57)摘要本发明提供了一种鮰爱德华氏菌灭活疫苗的制备方法，包括从病鱼体内分离的鮰爱德华氏菌的分离纯化，小体积活化培养，生物反应器的扩大培养，鮰爱德华氏菌的灭活、离心收集，提取毕赤酵母的基因组DNA，在灭活完全的菌体中加入毕赤酵母基因组DNA混合，制成鮰爱德华氏菌灭活疫苗。本发明的疫苗使用安全，无药物残留，免疫防治效果显著，能够有效预防斑点叉尾鮰爱德华氏菌病的发生，免疫保护率可达80％。使用可调连续注射器进行免疫接种方便，大大提高了免疫效率和接种疫苗剂量准确性。本发明的疫苗其制备方法操作简单，成本低廉，且疫苗可用于斑点叉尾鮰疾病的防治，具有很高的商业价值。CN1023795ACCNN110237097502370976A权利要求书1/1页1.一种斑点叉尾鮰爱德华氏菌病灭活疫苗的制备方法，其特征是：包括从病鱼体内分离的鮰爱德华氏菌的分离纯化，小体积活化培养，生物反应器的扩大培养，鮰爱德华氏菌的灭活、离心收集，提取毕赤酵母的基因组DNA，在灭活完全的菌体中加入毕赤酵母基因组DNA混合，制成鮰爱德华氏菌灭活疫苗。2CCNN110237097502370976A说明书1/2页斑点叉尾鮰爱德华氏病疫苗的制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种鱼的疾病的预防和防治方法，具体说是涉及斑点叉尾鮰爱德华氏病灭活疫苗的制备方法。背景技术[0002]斑点叉尾鮰原产于美洲，该鱼具有适应广、食性杂、生长快、肉质鲜嫩、出肉率高、无肌间刺、加工简单等特点，1984年从美国引入我国养殖，是当前水产养殖业的重要养殖品种之一。随着全球性海洋捕捞渔业资源的衰退，国际市场对水产养殖产品的需求越来越大。据不完全统计，我国斑点叉尾鮰年产量为10万吨左右，2009年出口量1.9万吨，出口额0.7亿美元，是我国水产品出口创汇主要品种之一。[0003]近年来随着片面地重视规模化发展和高产，造成斑点叉尾鮰养殖病害频频暴发，其中由鮰爱德华氏菌引起的斑点叉尾鮰肠道败血症成了鮰鱼养殖业危害最大的传染病，并且有逐年递增的趋势。病害的暴发与随之带来的产品安全问题已成为制约我国斑点叉尾鮰产业继续向前发展的瓶颈。然而，目前缺乏一套行之有效的方案预防和治疗该病，药物只能在早期起到控制病情的辅助性作用，但随着耐药和抗药性的产生和积累，该病的现状几乎是“无药可治可防”。疫苗免疫是预防和控制斑点叉尾鮰爱德华氏菌病最具前景、安全和环保的方法之一，必需及早研制。研究发现，斑点叉尾鮰爱德华氏菌病的流行菌种主要为Edwardsiellaictaluri。发明内容[0004]本发明的目的是为了控制斑点叉尾鮰爱德华氏菌病的传播与爆发，提供一种鮰爱德华氏菌灭活疫苗的制备方法，该方法能有效地预防鮰爱德华氏菌引发的鮰爱德华氏菌病，对养殖斑点叉尾鮰具有保护作用。[0005]本发明采取的技术方案是：[0006]本发明斑点叉尾鮰爱德华氏菌病灭活疫苗的制备方法主要包括鮰爱德华氏菌的分离纯化、小体积活化培养、生物反应器的扩大培养、鮰爱德华氏菌的灭活、离心收集、提取毕赤酵母的基因组DNA、在灭活完全的菌体中加入一定量毕赤酵母基因组DNA混合等步骤。[0007]申请人已将所述鮰爱德华氏菌菌种送到中国典型培养物保藏中心保藏，保藏日期为2010年7月30日，保藏中心保藏编号为CCTCCNO：M2010191，分类命名为鮰爱德华氏菌CME001，EdwardsiellaictaluriCME001。[0008]该方法利用分离到的高免疫原性强毒力鮰爱德华氏菌菌株，通过培养基和培养条件的优化培养提高主要保护性抗原的产量，以及采用的灭活方法可以减少灭活制备过程抗原的损失，加入毕赤酵母基因组DNA作为佐剂，组分的配伍设计科学合理，对目前养殖斑点叉尾鮰具有保护作用，有效地预防鮰爱德华氏菌引发的鮰爱德华氏菌病。[0009]本发明的有益效果：[0010]1.本发明的斑点叉尾鮰爱德华氏菌灭活疫苗使用安全，