提高栽培稻与小粒野生稻回交一代杂种获得率的新方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102668973A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102668973A(43)申请公布日2012.09.19(21)申请号201210179528.0(22)申请日2012.06.04(71)申请人广西壮族自治区农业科学院水稻研究所地址530007广西壮族自治区南宁市大学东路174号(72)发明人郭嗣斌高国庆韦宇李孝琼刘开强陈彩虹(74)专利代理机构北京君智知识产权代理事务所11305代理人向华(51)Int.Cl.A01H1/02(2006.01)A01H4/00(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书66页页附图附图33页(54)发明名称提高栽培稻与小粒野生稻回交一代杂种获得率的新方法(57)摘要本发明属于植物杂交育种技术领域，涉及一种提高栽培稻与小粒野生稻回交一代杂种获得率的新方法。首先，利用栽培稻作母本，小粒野生稻作父本进行杂交，经胚拯救得到了种间杂种F1植株；其次，再用种间杂种F1植株作母本，相应的栽培稻作父本进行回交，采用类似于杂交稻制种的方法，进行直接授粉，连续授粉3天，获得大量的远缘杂交回交一代杂种的幼胚，最后经胚拯救得到回交一代杂种BC1F1植株。此方法操作简单，成本低，能使栽培稻与小粒野生稻回交一代杂种的获得率从现有水平的0.02%-0.03%稳定提高到0.32%-0.35%，较好的解决了栽培稻与小粒野生稻回交一代杂种BC1F1难于获得的难题。CN10268973ACN102668973A权利要求书1/1页1.一种提高栽培稻与小粒野生稻回交一代杂种获得率的新方法，包括以下步骤：（1）用栽培稻做母本，用小粒野生稻做父本进行杂交，根据栽培稻和小粒野生稻的生育期，合理安排播差期，保证它们的花期相遇，对作为母本的所述栽培稻进行温汤去雄后剪颖，再以所述野生稻的花粉进行人工授粉，获得野栽交的种间杂种F1；待杂种幼胚发育10-12天后，取出小穗中膨大的子房进行胚拯救，获得野栽交的种间杂种F1植株；（2）对获得的野栽交的种间杂种F1植株进行稀植，株行距为30cm×50cm，待F1植株成活后，每隔5-7天施用尿素5.0kg/亩促分蘖，连续施用3-4次，并进行3次分蔸扩繁种植，尽可能获得较多F1植株；（3）合理安排播差期，保证所述栽培稻和所述种间杂种F1植株的花期相遇；并对栽培稻进行3-5期的分期播种，相邻两期间隔7-10天，保证父本的花期在30天左右；抽穗期，每天从所述杂种F1植株上通过分蔸带根取出当天开始开花的穗子，集中移植于塑料桶中，塑料桶中泥土深10-15厘米，水深5-7厘米，挂牌记载当天的日期，并从第2天开始取所述栽培稻的花粉进行人工直接授粉，连续授粉3天；根据塑料桶上挂牌记载的日期，选取已授粉10-12天的塑料桶，逐一取出其中的穗子，并在日光或灯光下，逆光查找子房膨大的小穗，随后取出小穗中膨大的子房进行胚拯救，获得野栽交的回交一代杂种BC1F1植株。2.根据权利要求1所述的提高栽培稻与小粒野生稻回交一代杂种获得率的新方法，其特征在于所述步骤（1）中对作为母本的栽培稻进行温汤去雄的方法是：用44℃-46℃的温水处理栽培稻的稻穗4-5分钟，进行杀雄处理。3.根据权利要求1所述的提高栽培稻与小粒野生稻回交一代杂种获得率的新方法，其特征在于所述步骤（1）和（3）中胚拯救的方法包括以下步骤：选取10-12天胚龄的膨大子房，先用70%的酒精消毒3分钟，再用0.1%的HgCl2灭菌10分钟，后用灭菌水清洗3-5次，采用部分子房培养的方式接种于1/4MS固体培养基上；在26±1℃的条件下进行暗培养，待发芽后移到光强为15000Lux的条件下进行光培养，培养温度为26±1℃，光照时间为24小时/天；到3叶期后将其暴露于空气中，加水，室温和日光下培养7天左右，然后移栽成苗。4.根据权利要求3所述的提高栽培稻与小粒野生稻回交一代杂种获得率的新方法，其特征在于所述部分子房培养的方式是：在无菌的条件下，将准备培养的子房，从中部切断胚乳，选取含有胚的部分进行培养。5.根据权利要求3所述的提高栽培稻与小粒野生稻回交一代杂种获得率的新方法，其特征在于所述1/4MS固体培养基按照如下方法制备：每1L1/4MS固体培养基由412.6mgNH4NO3、475.0mgKNO3、42.5mgKH2PO4、92.5mgMgSO4·7H2O、110.0mgCaCl2·2H2O、1.55mgH3BO3、5.575mgMnSO4·4H2O、2.15mgZnSO4·7H2O、0.0625mgNa2MoO4·2H2O、0.2075mgKI、0.00625mgCuSO4·5H2O、0.00625mgCoCl2·6H2O、13.9mgFeSO4·7H2O、14.92mgNa2EDTA·2H2O、0.