同色兜兰的杂交育种及其种苗繁殖方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103416294A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103416294103416294A(43)申请公布日2013.12.04(21)申请号201310337637.5(22)申请日2013.08.06(71)申请人广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所地址541006广西壮族自治区桂林市雁山区雁山街85号(72)发明人唐凤鸾黄宁珍何金祥赵志国石云平付传明(74)专利代理机构桂林市华杰专利商标事务所有限责任公司45112代理人杨雪梅(51)Int.Cl.A01H1/02(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书5页说明书5页(54)发明名称同色兜兰的杂交育种及其种苗繁殖方法(57)摘要本发明公开了同色兜兰的杂交育种及其种苗繁殖方法，包括人工授粉、种子成熟度的选择、种子萌发形成原球茎、原球茎分化形成幼苗、壮苗培养、试管苗移栽各步骤。当授粉成功后，将种子播种在萌发培养基上进行萌发，种子萌发后形成的原球茎转入幼苗分化培养基上使其分化形成小苗，小苗再转移到壮苗培养基上培养，形成的试管苗经过自然光照下练苗7~10天后出瓶栽培，成苗的移栽成活率可达80~95%。本发明的优点有：杂交结实率高；杂交种子萌发率高，成苗快，种苗品质好；本发明具有操作性强，应用价值高等优点，能有效缩短育种和生产周期、降低成本，对丰富兜兰品种、提高兜兰品质具有非常积极的意义。CN103416294ACN1034629ACN103416294A权利要求书1/1页1.同色兜兰的杂交育种及其种苗繁殖方法，其特征在于包括以下步骤:（1）人工授粉：将不同种类的野生兜兰植株引种种植在人工资源圃中，选同色兜兰作为亲本之一，与其它兜兰属植物互为父、母本进行杂交，在花朵开放4~10天，花粉块开始由硬变软时，采集父本的花粉人工授于母本的柱头上，两个亲本互为父、母本进行正反交,并进行套袋处理，防止外来花粉的干扰，5天后去除套袋；（2）种子成熟度的选择：选择人工授粉后生长150~180天，蒴果充分膨大，果皮由浓绿开始转黄时的果实种子为最佳材料；（3）种子萌发形成原球茎：当杂交果实发育到150~180天时，整果剪下先用自来水清洗干净，然后依次用体积分数为70~75%酒精溶液浸泡1~2分钟后，用质量分数为0.1~0.2%的升汞溶液浸泡消毒15~20分钟，再用无菌水冲洗4~5次，用无菌滤纸吸干果实表面的水分，纵向切开果实，将种子接种到萌发培养基上，在温度25~28℃的黑暗条件培养，培养20天时种子开始膨大形成无色透明的或白色的原球茎，30~50天达到萌发高峰；所述种子萌发培养基含：1/2~1/6MS、BA1.0~2.0mgL-1、NAA0.1~1.0mgL-1、椰子汁100~200mlL-1、活性炭1.0~2.0gL-1、蔗糖20~30gL-1、琼脂4.5~5.5gL-1、pH为5.0~5.5；（4）原球茎分化形成幼苗：将种子萌发形成的原球茎及时转入幼苗分化培养基中，在温度25~28℃、光照强度30µmol·m-2·s-1、光照时间12hd-1的条件下培养，培养20~30天，原球茎分化形成具两片叶子的小苗；所述幼苗分化培养基含：1/4MS、BA0.8~1.2mgL-1或KT0.5~1.0mgL-1、NAA0.1~0.5mgL-1、椰子汁100~200mlL-1、活性炭0.5~1.0gL-1、蔗糖20~30gL-1、琼脂4.5~5.5gL-1、pH为5.0~5.5；（5）壮苗培养：将原球茎分化形成的小苗转接到壮苗培养基上培养，在温度25~28℃、光照强度30µmol·m-2·s-1、光照时间12hd-1的条件下，培养30~50天形成健壮的植株；所述壮苗培养基含：MS、NAA0.5~2.0mgL-1、马铃薯汁150~250gL-1、活性炭1.0~2.0gL-1、蔗糖20~30gL-1、琼脂4.5~5.5gL-1、pH为5.0~5.5；（6）试管苗移栽：将根系生长良好、株高达5cm的植株转移到自然光下练苗7~10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入园土：树皮体积比为1：1~1：2的混合基质中培养。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：步骤（3）中所述种子萌发培养基含：1/4MS、BA2.0mgL-1、NAA0.5mgL-1、椰子汁200mlL-1、活性炭1.0gL-1、蔗糖20gL-1、琼脂4.5gL-1、pH为5.5。3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：步骤（4）中所述幼苗分化培养基含：1/4MS、KT1.0mgL-1、NAA0.5mgL-1、椰子汁150mlL-1、活性炭0.5gL-1、蔗糖20gL-1、琼脂4.5gL-1、pH为5.2。4.根据权利要求1所述的方法，其特征是：步骤（5）中所