一种番茄苗期根结线虫病抗性鉴定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号CN105165434B(45)授权公告日2018.05.25(21)申请号201510660378.9(51)Int.Cl.(22)申请日2015.10.14A01G7/00(2006.01)(65)同一申请的已公布的文献号(56)对比文件申请公布号CN105165434ACN102187774A,2011.09.21,权利要求1.CN101496481A,2009.08.05,全文.(43)申请公布日2015.12.23CN101999287A,2011.04.06,全文.(73)专利权人广西壮族自治区农业科学院植物陆秀红等.《番茄种质材料对南方根结线虫保护研究所的抗性鉴定及Mi-1基因检测》.《西南农业学报》地址530007广西壮族自治区南宁市大学.2013,第26卷(第1期),第163--165页.东路174号李戌清.《番茄根结线虫研究进展》.《浙江农(72)发明人陆秀红刘志明黄金玲张禹业学报》.2012,第24卷(第4期),第748-752页.黄婧高淋淋审查员宋慧娟(74)专利代理机构深圳市科吉华烽知识产权事务所(普通合伙)44248代理人胡吉科权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种番茄苗期根结线虫病抗性鉴定方法(57)摘要本发明提供一种番茄苗期根结线虫病抗性鉴定方法，包括以下几个步骤：步骤A：材料准备：步骤B:抗性鉴定:将番茄苗移至玻璃瓶中，向玻璃瓶内注入营养液，接种根结线虫二龄幼虫,将玻璃瓶放置人工气候箱进行培养，记录根结及卵囊产生的时间。步骤C:抗性评价:接种根结线虫二龄幼虫后，观察根结线虫发育进程，当侵染已知感病番茄品种的根结线虫完成一个世代时将待抗性评价的番茄品种取出调查根结病级，按根结病级计算根结指数，根据根结指数进行品种的抗感特性评价。本方法可以对整个抗性鉴定过程进行可视观察，一旦侵染已知感病材料的根结线虫完成一个世代立刻进行抗性评价。CN105165434BCN105165434B权利要求书1/2页1.一种番茄苗期根结线虫病抗性鉴定方法，其特征在于，包括以下几个步骤：步骤A：材料准备：步骤1.制备霍格兰营养液；步骤2.番茄材料：将待抗性评价的番茄品种播种在无病的育苗盆中，待苗长到4-5片真叶时将番茄苗拔出用清水将根部冲洗干净后用于抗性鉴定实验；步骤3.根结线虫二龄幼虫：取形成大量根结及卵囊的植物根部在清水中冲洗，洗去表面的杂质；然后将洗干净的植物根放于烧杯中，加次氯酸钠并用玻璃棒迅速搅拌，使其混合均匀；之后过筛，反复多次冲洗后取过目筛，即获得有大量卵粒的悬浮液；再将该悬浮液缓缓倒入孵化筛中孵化获取根结线虫二龄幼虫；步骤B:抗性鉴定:分别将待抗性鉴定番茄品种即红吉星、Bss368、FLA653-3-1-0、感性对照大明星和抗病对照仙客1号，即携带Mi抗病基因苗移至玻璃瓶中，向玻璃瓶内注入营养液，接种根结线虫二龄幼虫,将玻璃瓶放置人工气候箱进行培养，记录根结及卵囊产生的时间；步骤C:抗性评价:接种根结线虫二龄幼虫后，观察根结线虫发育进程，当侵染已知感病番茄品种的根结线虫完成一个世代时将待抗性评价的番茄品种取出调查根结病级，按根结病级计算根结指数，根据根结指数进行品种的抗感特性评价；番茄品种根结线虫病抗性水平按照以下标准进行确定：根结分级标准：0级：无根结；1级：有根结根数占整个根系的5％以下；2级：有根结根数占整个根系的5％～25％；3级：有根结根数占整个根系的26％～50％；4级：有根结根数占整个根系的51％～75％；5级：有根结根数占整个根系的76％以上；公式为：抗性分级标准，以根结指数为依据，分为5个等级：免疫：根结指数为0；高抗：根结指数为1.0～10.0；抗病：根结指数为10.1～25.0；感病：根结指数为25.1～40.0；高感：根结指数为40.0以上；所述步骤1中，营养液配方由A液、B液、C铁盐溶液和D微量无素液组成，A液为：四水硝酸钙900-1000mg/L、硝酸钾450-550mg/L、硝酸铵70-90mg/L；B液为：磷酸二氢钾120-150mg/L、七水硫酸镁450-550mg/L；C铁盐溶液为：七水硫酸亚铁5-6mg/L、乙二胺四乙酸二钠6-8mg/L；D微量元素液为：碘化钾0.002-0.005mg/L、硼酸0.02-2CN105165434B权利要求书2/2页0.04mg/L、硫酸锰0.1-0.2mg/L、硫酸锌0.03-0.05mg/L、钼酸钠0.0005-0.001mg/L、硫酸铜0.005-0.03mg/L；所述步骤3中，次氯酸钠的质量浓度为5-10％。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3中，过筛步骤分别过180目、350目、500目的筛。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述