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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108660167A(43)申请公布日2018.10.16(21)申请号201710195282.9(22)申请日2017.03.29(71)申请人武汉茵茂特生物技术有限公司地址432000湖北省武汉市东湖开发区东信路数码港E幢(72)发明人曾超徐灿陈迈(51)Int.Cl.C12P13/04(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表1页(54)发明名称L-草铵膦的生物合成方法(57)摘要本发明公开了一种L-草铵膦的生物合成方法,包括:以2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸为底物、以2-丙胺为氨基供体,与溶剂构成反应体系,再向所述反应体系中加入生物催化剂、辅酶和添加剂进行生物转化反应,得到含有L-草铵膦的转化液。其工艺流程简单,对设备无特殊要求,适用于工业化;L-草铵膦的收率达85%以上,纯化后L-草铵膦晶体纯度达到98%以上,光学纯度为99%以上;所使用的生物催化剂催化效果好,用量少,专一高效;芦荟提取粉、乙醇和氯化钙复配作为添加剂,缩短转化时间效果明显,L-草铵膦的收率也显著提升。CN108660167ACN108660167A权利要求书1/1页1.一种L-草铵膦的生物合成方法,其特征在于,包括:以2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸为底物、以2-丙胺为氨基供体,与溶剂构成反应体系,再向所述反应体系中加入生物催化剂、辅酶和添加剂进行生物转化反应,得到含有L-草铵膦的转化液。2.根据权利要求1所述的L-草铵膦的生物合成方法,其特征在于,所述生物催化剂为来源于Vibriofluvialis的草铵膦转氨酶,所述来源于Vibriofluvialis的草铵膦转氨酶的基因工程菌的编码基因是序列表中SEQIDNO:1所示的核苷酸序列;所述辅酶为磷酸吡哆醛。3.根据权利要求2所述的L-草铵膦的生物合成方法,其特征在于,所述的溶剂为缓冲溶液,所述缓冲溶液选自磷酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、Tri-HCl缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲溶液、MOPS缓冲溶液中的一种。4.根据权利要求3所述的L-草铵膦的生物合成方法,其特征在于,所述添加剂选自芦荟提取粉、柳树叶提取粉、丙酮、聚乙二醇、二甲基亚砜、乙醇和氯化钙中的一种或几种的混合物。5.根据权利要求4所述的L-草铵膦的生物合成方法,其特征在于,所述添加剂为芦荟提取粉、乙醇和氯化钙按质量比为2-5:3-8:1组成的混合物。6.根据权利要求5所述的L-草铵膦的生物合成方法,其特征在于,所述添加剂为芦荟提取粉、乙醇和氯化钙按质量比为3:5:1组成的混合物。7.根据权利要求5或6所述的L-草铵膦的生物合成方法,其特征在于,所述芦荟提取粉的制备方法为:将鲜芦荟破碎、榨汁,汁渣分离,将所得渣在80℃下干燥6-8h,粉碎,过30目筛,得到芦荟取物粉。8.根据权利要求7所述的L-草铵膦的生物合成方法,其特征在于,转化体系的pH值控制为5-10,控制所述转化体系的温度为20-60℃;反应体系搅拌转速控制为150-250r/min。9.根据权利要求7所述的L-草铵膦的生物合成方法,其特征在于,所述生物催化剂的浓度控制为10-30g/L;所述添加剂与生物催化剂的质量比控制为1-5%。10.根据权利要求8或9所述的L-草铵膦的生物合成方法,其特征在于,转化体系的pH值控制为6-7,所述转化体系的温度控制为25-40℃;反应体系搅拌转速控制为180-220r/min,所述生物催化剂的浓度控制为15-20g/L;所述添加剂与生物催化剂的质量比控制为2.5-4%。2CN108660167A说明书1/7页L-草铵膦的生物合成方法技术领域[0001]本发明涉及农药的制备方法,具体地指一种L-草铵膦的生物合成方法。背景技术[0002]草铵膦,化学名称为4-[羟基(甲基)膦酰基]-DL-高丙氨酸,由赫斯特公司(现德国拜耳公司)于上个世纪80年代开发生产,属膦酸类除草剂,是谷氨酰胺合成抑制剂,非选择性触杀型除草剂,其作为除草剂获得登记使用是1984年。2004年我国才有草铵膦原药登记,2005年我国才有产品登记。[0003]草甘膦自广泛应用以来,抗草甘膦杂草不断增加,危害逐步加重。百草枯是一种强烈的杀灭杂草除莠剂,对人畜有很强的毒性作用。2014年7月1日,我国撤销百草枯水剂登记和生产许可、停止生产;2016年7月1日停止水剂在国内销售和使用。草铵膦是世界大吨位农药品种,也是世界第二大转基因作物耐受除草剂。草铵膦毒性低,较为安全,在土壤中易于降解,对作物安全,不易飘移,除草谱广,活性高,用量少,环境压力小,杀草迅速,能快速杀死100种以上的禾本科和阔叶杂草,可用水做基剂,使用安全方便,这些是该品优于其他除草剂的特点,所以这个产品在