一种制备、提取以及纯化苏氨酸的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109136299A(43)申请公布日2019.01.04(21)申请号201710463735.1(22)申请日2017.06.19(71)申请人卢松地址010070内蒙古自治区呼和浩特市经济技术开发区金川区经二路内蒙古阜丰生物科技有限公司(72)发明人李晓永伏广好徐淑伟徐亚娟宁晓斌王彦妮刘苏宜张建国(51)Int.Cl.C12P13/08(2006.01)C07C227/40(2006.01)C07C229/22(2006.01)C12R1/19(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种制备、提取以及纯化苏氨酸的方法(57)摘要本发明属于生物发酵技术领域，公开了一种制备、提取以及纯化苏氨酸的方法，其包括如下步骤：1）发酵，2）离心，3）微滤和超滤，4）浓缩、等电和结晶。本发明工艺简单可行，苏氨酸发酵效率、收率以及纯度高，应用前景广阔。CN109136299ACN109136299A权利要求书1/1页1.一种制备、提取以及纯化苏氨酸的方法，其包括如下步骤：1）发酵，2）离心，3）微滤和超滤，4）浓缩、等电和结晶。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1）发酵：将大肠杆菌种子液以8％的接种量接种到发酵罐，发酵时间为72小时，得到发酵液；所述发酵时间分为两个阶段：a）：第1-70小时，控制温度为32℃，常压，其中，在第60小时，添加曲拉通X-100，添加量为1-2μg/ml；b）：第71-72小时，控制温度为37-38℃，压强为2-3个大气压；2）离心：利用高速碟片分离机将发酵液分为苏氨酸料液和菌体蛋白沉淀，收集苏氨酸料液；3）微滤和超滤：往苏氨酸料液添加1.5wt%的活性炭，200rpm搅拌20min，然后静置60min，微滤膜过滤收集滤液，将滤液通过超滤膜，收集超滤液；4）浓缩、等电和结晶：将超滤液浓缩成原体积的四分之一，然后缓慢降温至16℃，调节成pH为6.1-6.2的等电溶液；等电溶液沉降12小时，离心，收集结晶的苏氨酸，将结晶的苏氨酸烘干，即得。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵罐培养基组分为：葡萄糖60g/L，玉米浆15g/L，硫酸铵5g/L，FeSO40.02g/L，MgSO40.02g/L，KH2PO40.01g/L，K2HPO40.01g/L，pH值6.8。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述微滤膜为无机陶瓷膜，截留分子量为10000Da，微滤温度为32℃。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超滤膜的截留分子量为200Da，超滤温度为32℃。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述高速碟片机的转速为4000rpm，时间为3min。7.按照权利要求1-5任其一制备的苏氨酸。2CN109136299A说明书1/4页一种制备、提取以及纯化苏氨酸的方法[0001]技术领域[0002]本发明属于生物发酵技术领域，具体涉及一种制备、提取以及纯化苏氨酸的方法。背景技术[0003]苏氨酸（Threonine，简写为Thr），学名2-氨基-3-羟基丁酸，属于脂肪族氨基酸，微甜，因结构与苏糖相似而得名，是构成人和动植物蛋白质的一种必需氨基酸，主要用于医药、化学试剂、营养强化剂，可以强化乳制品，具有恢复人体疲劳，促进生长发育的效果。近年来，随着经济的发展，市场对苏氨酸需求持续稳定增长，是需求增长最快的氨基酸品种之一，特别是在化学及生化、食品添加剂、饲料添加剂等方面的用量增长迅速，大有取代色氨酸而成为除赖氨酸、蛋氨酸以外的发展最迅速的第三大氨基酸。[0004]苏氨酸发酵技术目前主要存在发酵效率低下以及纯度不达标的缺陷。大肠杆菌工程菌株是微生物工业发酵生产苏氨酸的主要菌株。人们一直通过各种方法改造菌株以提高氨基酸的产量，早期应用最广泛的为各种条件下的诱变育种，而随着氨基酸生物代谢途径的揭秘，有目的的在分子水平上对代谢途径进行改造也渐渐显露其优势，另外，中游的发酵条件优化过程以及下游的回收净化过程也是一个重点。但是，对于氨基酸分泌过程的研究，却起步较晚，而且人们一直把注意力集中在细胞膜氨基酸的转运蛋白上。鉴于上述缺陷，申请人之前的专利技术“一种超低水份苏氨酸生产方法”采用混合发酵的方式，发酵效率有所提高，但是混合发酵工艺参数稳定性较差，不利于工业化生产，而且增加了菌株培养流程。发明内容[0005]为了解决现有技术的缺陷，本发明提出了一种制备、提取以及纯化苏氨酸的方法。本发明方法提高了发酵效率，纯度和收率也符合行业标准。[0006]本发明是通过如下技术方案来实现的：一种制备、提取以及纯化苏氨酸的方法，其包括如下步骤：1）发酵，2）离心，3）微滤和超滤，4）浓缩、等电和结晶。[0