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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109180755A(43)申请公布日2019.01.11(21)申请号201811102849.4(22)申请日2018.09.20(71)申请人湖北志林农业科技开发有限公司地址438700湖北省黄冈市英山县孔家坊乡王家畈村八组(72)发明人肖玉林(51)Int.Cl.C07H15/256(2006.01)C07H1/08(2006.01)权利要求书2页说明书8页(54)发明名称一种从甜茶叶中提取甜茶苷的方法(57)摘要一种从甜茶叶中提取甜茶苷的方法,包括以下步骤:(1)将甜茶叶粉碎,过筛,加水,连续逆流提取,过滤;(2)加入酶制剂酶解,灭活,冷却,絮凝,过滤,水洗滤渣;(3)超滤、纳滤;(4)上大孔吸附树脂层析柱吸附,水洗,水洗液弃掉,有机溶剂梯度洗脱,减压浓缩;(5)上氧化铝层析柱吸附,水洗,减压浓缩;(6)加入活性炭,搅拌,过滤,减压浓缩,喷雾干燥;(7)有机溶剂溶解,过滤,结晶,抽滤,真空干燥,粉碎,得甜茶苷产品。本发明方法所提取的甜茶苷产品呈纯白色,纯度≥99%,收率≥90.5%;本发明方法操作工艺简单,提取时间短,能耗、成本低,可实现连续大规模生产。CN109180755ACN109180755A权利要求书1/2页1.一种从甜茶叶中提取甜茶苷的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)粉碎、提取:将甜茶叶粉碎,过筛,加水,进行连续逆流提取,过滤,得提取液;(2)酶解、絮凝:在步骤(1)所得提取液中加入酶制剂,进行酶解,酶解液灭活,冷却,絮凝,过滤,水洗滤渣至无甜味,得絮凝液;(3)超滤、纳滤:将步骤(2)所得絮凝液进行超滤,纳滤,得纳滤截留液;(4)大孔吸附树脂吸附:将步骤(3)所得纳滤截留液上大孔吸附树脂层析柱吸附,水洗至无甜味,水洗液弃掉,再用有机溶剂梯度洗脱,减压浓缩,得浓缩液;(5)氧化铝精制:将步骤(4)所得浓缩液上氧化铝层析柱吸附,收集流出液,水洗至无甜味,收集水洗液,流出液和水洗液减压浓缩,得浓缩液;(6)脱涩、脱苦:在步骤(5)所得浓缩液中,加入活性炭,搅拌,过滤,减压浓缩,喷雾干燥,得甜茶苷粗品;(7)结晶:将步骤(6)所得甜茶苷粗品用有机溶剂溶解,过滤,结晶,抽滤,真空干燥,粉碎,得甜茶苷产品。2.根据权利要求1所述从甜茶叶中提取甜茶苷的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述过筛的目数为10~50目;所述水的总用量为甜茶叶质量的5~30倍;所述连续逆流提取的温度为80~100℃,每次提取的时间为1~4h,提取的次数≥1次;用100~300目滤布过滤。3.根据权利要求1或2所述从甜茶叶中提取甜茶苷的方法,其特征在于:步骤(2)中,所述酶制剂的添加量为提取液质量的0.01~0.5%;所述酶制剂为纤维素酶制剂、半纤维素酶制剂、果胶酶制剂或蛋白酶制剂中的一种或几种;所述酶解的温度为40~60℃,pH值为2.0~9.0,时间为1~2h;所述灭活的温度为90~120℃,时间为30~60s,压力为常压。4.根据权利要求1~3之一所述从甜茶叶中提取甜茶苷的方法,其特征在于:步骤(2)中,所述絮凝是:将絮凝剂加入酶解液中进行絮凝,加入的过程中不断搅拌,至pH值为2~6,再搅拌0.5~1.5h,静置0.5~1.5h,然后调节pH值≥8,再搅拌0.5~1.5h,静置1~4h;所述絮凝剂为FeCl3、FeSO4或AlCl3中的一种或几种;用饱和石灰水调节pH值≥8;所述过滤方式为板框压滤,滤膜孔径为0.4~30μm;水洗滤渣的用水量为甜茶叶原料质量的1~2倍。5.根据权利要求1~4之一所述从甜茶叶中提取甜茶苷的方法,其特征在于:步骤(3)中,用于超滤的超滤膜为陶瓷膜,孔径为0.3~1.0μm;所述纳滤是将超滤液先通过截留分子量为800~5000道尔顿的纳滤膜,水赶膜至透过液无甜味,透过液再通过截留分子量为100~500道尔顿的纳滤膜,水赶膜至截留液的百利度≥20%为止,得纳滤截留液。6.根据权利要求1~5之一所述从甜茶叶中提取甜茶苷的方法,其特征在于:步骤(4)中,所述大孔吸附树脂层析柱由≥2根层析柱组成,纳滤截留液先上第1根层析柱,待其流出液有甜味后,流出液上串接的第2根层析柱,同时纳滤截留液开始上第2根层析柱,以此类推,上柱完成后,将第1根至最末1根层析柱串接起来进行水洗,水洗液弃掉,再用有机溶剂分别对每根层析柱进行梯度洗脱;所述大孔吸附树脂层析柱的径高比为1:2~8;所述大孔吸附树脂与甜茶叶原料的体积质量比为1:5~10;所述上柱的流速为1~4BV/h;所述大孔吸附树脂的型号为D-101、AB-8、LX-T28、DM-130或X-5中的一种或几种;所述水洗的流速为1.0~3.0BV/h;所述有机溶剂梯度洗脱的流速为0.5~2.0BV/h;所