鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109254090A(43)申请公布日2019.01.22(21)申请号201811088112.1G01N30/72(2006.01)(22)申请日2018.09.18(71)申请人山东商业职业技术学院地址250100山东省济南市历城区山东济南旅游路4516号申请人山东商院食品检测有限公司(72)发明人杜国辉姜冬峰王春慧刘永慧徐翠翠张学娜齐沙沙(74)专利代理机构济南舜昊专利代理事务所(特殊普通合伙)37249代理人宋玉霞(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/14(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法(57)摘要本发明属于兽药残留量测定的技术领域，特别是涉及鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法。具体是使用有机溶液提取样品中甲硝唑及羟基甲硝唑，通过液液萃取去除脂类，利用PRIMEHLB固相萃取柱进一步去除提取液中干扰物，最后采用超高效液相-质谱/质谱联用仪（HPLC/MS/MS）检测。结果表明：本发明方法中甲硝唑的保留时间为0.64min，羟基甲硝唑的保留时间为0.82min，线性范围在0.5ng/ml-100ng/ml，检出限为0.5μg/kg，回收率80-110%。CN109254090ACN109254090A权利要求书1/1页1.鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法，具体步骤如下：（1）提取：样品2-5g，于50ml离心管中，加乙腈5-20mL，加入无水硫酸钠1-5g，涡旋混匀，6000-10000转/分，离心5-10min；取上层溶液，加入5-20mL正己烷，涡旋，6000-10000转/分，离心5-10min,下层溶液待净化；（2）净化：取上述步骤（1）得到的下层溶液2-5mL，加载到PRIMEHLB固相萃取柱（200mg，6cc）,保持一秒一滴流速，收集全部流出液；（3）浓缩：取1-4mL上述步骤（2）得到的流出液氮气吹干，加入1.0mL0.1%甲酸水-甲醇，溶解残渣，过0.2μm微孔滤膜，上HPLC/MS/MS测试；（4）测定：采用液相色谱法进行检测，其中色谱柱为AcqμityBEHC18（2.1mm*5mm，1.7μm），柱温：30-40℃，进样量：1μl；流动相：溶剂A为0.1%甲酸水，溶剂B为乙腈，梯度洗脱，鸡蛋中甲硝唑及羟基甲硝唑最低检出均为浓度为0.5μg/kg。2.根据权利要求1所述的鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法，其特征在于，甲硝唑及其代谢物，涉及甲硝唑及羟基甲硝唑。3.根据权利要求1所述的鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法，其特征在于，步骤（3）中，甲酸水和甲醇的体积比为50：50。4.根据权利要求1所述的鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法，其特征在于，质谱条件：离子源：ESI(+)；毛细管电压：3.0KV；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：450℃；锥孔反吹气流量：50L/h；脱溶剂气流量：800L/h，检测方式为多反应监测模式扫描（MRM）。5.根据权利要求1所述的鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法，其特征在于，步骤（4）中，柱温：35℃。2CN109254090A说明书1/4页鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法技术领域[0001]本发明属于兽药残留量测定的技术领域，特别是涉及鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法。背景技术[0002]甲硝唑属于硝基咪唑类药物，在农业生产中，常作为驱除动物体内寄生虫的药物，加入动物饲料后，造成鸡蛋中甲硝唑的残留。由于甲硝唑对人体有多种毒副作用，尤其是具有潜在致癌性和致遗传性变异作用，而且甲硝唑进入人体后能快速分布于全身，因此对鸡蛋中甲硝唑及其代谢产物残留的检验非常必要。我国农业部193号公告，要求不得用于鸡蛋。目前甲硝唑及其代谢物含量测定方法大多采用液相色谱法或液相色谱串联质谱法，国家现行的标准方法中采用固相萃取法、GPC法进行样品预处理或采用内标法定量，过程繁琐，成本较高。发明内容[0003]为了解决目前甲硝唑及代谢产物检测的过程繁琐、成本较高的问题，本发明提供了一种使用超高效液相-质谱/质谱联用仪（HPLC/MS/MS）法测定鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的方法。具体是使用有机溶液提取样品中甲硝唑及羟基甲硝唑，通过液液萃取去除脂类，利用PRIMEHLB固相萃取柱进一步去除提取液中干扰物，最后采用超高效液相-质谱/质谱联用仪（HPLC/MS/MS）检测。结果表明：本发明方法中甲硝唑的保留时间为0.64min，羟基甲硝唑的保留时间为0.82min，线性范围在0.5ng/ml-100ng/ml，检出限为0.5μg/kg，回