一种脐血单个核细胞的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110229788A(43)申请公布日2019.09.13(21)申请号201910291957.9(22)申请日2019.04.11(71)申请人广州市天河诺亚生物工程有限公司地址510000广东省广州市高新技术产业开发区南云四路1号(72)发明人嵐山芮魏伟马天宝林汉标许超(74)专利代理机构广州三环专利商标代理有限公司44202代理人颜希文宋静娜(51)Int.Cl.C12N5/078(2010.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种脐血单个核细胞的制备方法(57)摘要本发明提供一种脐血单个核细胞的制备方法，包括以下步骤：(1)将采集到的脐血转移到无菌三联袋中；(2)将转移后脐血进行离心分离；(3)将离心完成的血袋放于分浆夹上去除血浆上清，沉淀物即为单个核细胞制剂。本发明的制备方法没有使用羟乙基淀粉和Ficoll淋巴细胞分离液，制备出来的单个核细胞制剂安全无副作用，且单个核细胞的回收率达到了95％以上，细胞活性在93％以上。同时本发明还提供了一种脐血单个核细胞制剂，该制剂体积小，只有10ml，便于新生儿的输注与使用。CN110229788ACN110229788A权利要求书1/1页1.一种脐血单个核细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将采集到的脐血转移到无菌三联袋中；(2)将转移后脐血进行离心分离；(3)将离心完成的血袋放于分浆夹上去除血浆上清，沉淀物即为单个核细胞制剂。2.如权利要求1所述的脐血单个核细胞的制备方法，其特征在于，在脐血中加入抗凝剂。3.如权利要求1所述的脐血单个核细胞的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)离心的条件是温度10℃-20℃、离心力400-800G、离心时间10-15分钟。4.一种如权利要求1-3任一项所述的脐血单个核细胞方法制备的脐血单个核细胞制剂，其特征在于，所述脐血单个核细胞制剂为10ml。5.如权利要求1所述的脐血单个核细胞制剂，其特征在于，所述制剂中单个核细胞浓度为14～29×106/ml。2CN110229788A说明书1/5页一种脐血单个核细胞的制备方法技术领域[0001]本发明涉细胞技术领域，具体涉及一种脐血单个核细胞的制备方法。背景技术[0002]在免疫细胞治疗中，一般采用羟乙基淀粉(hydroxyethylstarch，HES)离心沉淀法或Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC)。[0003]虽然羟乙基淀粉离心沉淀法虽然在操作上比较简便，细胞回收率可达到80％以上，但是细胞分离的效果不佳，得到的细胞纯度难以满足要求，有较多的血小板、红细胞及粒细胞等。Ficoll密度梯度离心法，由于红细胞、粒细胞比重大，离心后会沉于管底；而淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后会漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中，吸取分层液液面的白膜层细胞，就可从外周血中分离得到单个核细胞。这个方法所得到的细胞纯度较好，红细胞比例少，但是细胞回收率低，小于50％。[0004]同时，羟乙基淀粉离心沉淀法采用的羟乙基淀粉属于大分子物质，在身体里面不容易代谢，尤其对于早产儿完全不能应用。而Ficoll也有轻微毒性，输注早产儿体内安全性无法保证。[0005]因此，寻求一种分离效果好，细胞回收率高，且能直接应用于婴儿，尤其是早产儿的脐血单个核细胞的制备方法，成为亟待解决的问题。发明内容[0006]为克服解决上述技术问题，本发明提供一种脐血单个核细胞的制备方法，通过改进现有的脐血单个核细胞的制备方法，得到可用于刚出生的早产儿临床输注的脐血单个核细胞制剂，利用本方法制备的制剂安全性高细胞活性高，回收率高。[0007]为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：一种脐血单个核细胞的制备方法，包括以下步骤：[0008](1)将采集到的脐血转移到无菌三联袋中；[0009](2)将转移后脐血进行离心分离；[0010](3)将离心完成的血袋放于分浆夹上去除血浆上清，沉淀物即为单个核细胞制剂。[0011]优选地，在脐血中加入抗凝剂。[0012]优选地，所述步骤(2)离心的条件是温度20℃、离心力500G、离心时间13分钟。[0013]本发明还提供一种由上述方法制备的脐血单个核细胞制剂。[0014]优选地，所述脐血单个核细胞制剂单核细胞浓度为14～29×106/ml。[0015]优选地，所述脐血单个核细胞制剂为10ml。[0016]本发明的有益效果：[0017]1.本发明获取单个核细胞过程中没有使用羟乙基淀粉和Ficoll淋巴细胞分离液，制备出来的单个核细胞制剂安全无副作用。而且单个核细胞的回收率达到了95％以上，细胞活性好。3CN110229788A说明书2/5页[0018]2.本发明