血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111157463A(43)申请公布日2020.05.15(21)申请号201811324746.2(22)申请日2018.11.08(71)申请人广州医药研究总院有限公司地址510240广东省广州市海珠区江南大道中134号(72)发明人孙晶晶凌珊谢瑞吴家欣吴宜(74)专利代理机构广州华进联合专利商标代理有限公司44224代理人黄菲万志香(51)Int.Cl.G01N21/31(2006.01)G01N1/38(2006.01)权利要求书2页说明书8页(54)发明名称血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法(57)摘要本发明涉及一种血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法。该方法包括以下步骤：(A)制备微生物悬液；(B)制备标准曲线：分别向微生物悬液中加入梯度浓度的乙酰螺旋霉素，培养，测定吸光度，制备得到标准曲线；(C)样品采集：采集血浆；(D)分别精密量取待测血浆样品和空白血浆样品，加入步骤(A)的微生物悬液中混匀，得待测混合溶液和空白对照；(E)测定待测混合溶液的微生物浓度；(F)将待测混合溶液的微生物浓度与空白对照进行比较，通过标准曲线计算得出乙酰螺旋霉素的浓度。本发明方法的分析时间短、灵敏度高，准确度、精密度、回收率、稳定性经考察后均符合要求，适用于乙酰螺旋霉素在体内的药代动力学试验研究。CN111157463ACN111157463A权利要求书1/2页1.一种血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(A)制备微生物悬液；(B)制备标准曲线：分别向微生物悬液中加入梯度浓度的乙酰螺旋霉素，培养，测定吸光度，制备得到标准曲线；(C)样品采集：采集血浆；(D)分别精密量取待测血浆样品和空白血浆样品，加入步骤(A)的微生物悬液中混匀，得待测混合溶液和空白对照；(E)测定待测混合溶液的微生物浓度；(F)将待测混合溶液的微生物浓度与空白对照进行比较，通过标准曲线计算得出乙酰螺旋霉素的浓度。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(A)中，所述微生物悬液按以下步骤制备：A1：取微生物接种在营养琼脂斜面上；A2：35-37℃恒温培养20小时-22小时，于2-8℃临时保存；A3：用灭菌水或(0.9±0.1)％氯化钠溶液将微生物洗下，备用；A4：将步骤A3得到的微生物移入经灭菌的置有营养肉汤的试管中，振摇成均匀的菌液。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(B)中，所述制备标准曲线包括以下步骤：B1：称取乙酰螺旋霉素对照品，用溶剂溶解，用灭菌水稀释为特定浓度溶液；B2：移取适量B1所得溶液，用缓冲液稀释，得不同浓度的标准系列溶液；B3：在不同容器中精密量取微生物悬液，分别加入等体积的空白血浆和等体积的标准系列溶液，混合均匀。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤B1中，每5mg乙酰螺旋霉素对照品加入溶剂(2±0.2)ml。5.根据权利要求3或权利要求4所述的检测方法，其特征在于，步骤B2中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液；所述磷酸盐缓冲液的pH＝7-8。6.根据权利要求3或权利要求4所述的检测方法，其特征在于，步骤B1中，所述溶剂为乙醇。7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(D)中，所述空白对照由以下步骤制备：精密吸取一定体积微生物悬液，加入等体积空白血浆和等体积磷酸盐缓冲液，充分振摇。8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(E)中，所述测定待测混合溶液的微生物浓度按以下步骤进行：E1：将步骤(D)的待测混合溶液于35-40℃恒温震荡培养3小时-7小时，取出，加入甲醇水溶液，放置5分钟-20分钟后；E2：在入＝(570±5)nm处测定吸光度。9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，步骤E1中，所述甲醇水溶液的体积浓度为20-40％；步骤E2中，所述吸光度为0.3-0.7。10.根据权利要求1-9任一项所述的检测方法，其特征在于，所述血浆来自于人或动物；2CN111157463A权利要求书2/2页所述微生物为金黄色葡萄球菌。3CN111157463A说明书1/8页血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法技术领域[0001]本发明涉及抗生素类药物的血药浓度监测技术领域，特别是涉及一种血浆中乙酰螺旋霉素含量的检测方法。背景技术[0002]乙酰螺旋霉素(Acetylspiramycin)是由单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋毒素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ和双乙酰螺旋霉素Ⅲ四个组分为主的混合物，结构和成分复杂，具体结构如式1所示。纯品为白色至微黄色粉末，在甲醇、乙醇、丙酮或乙醚中溶解，在水中几乎不溶，在石油醚中不溶。对紫外线敏感，在阳光下照射1天，可分解50％。乙酰螺旋霉素对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽