一种羊胚胎素活性肽的提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111647039A(43)申请公布日2020.09.11(21)申请号202010645994.8A61K8/64(2006.01)(22)申请日2020.07.07A61K38/02(2006.01)A61P1/00(2006.01)(71)申请人肖启森A61P1/04(2006.01)地址421200湖南省衡阳市衡阳县樟树乡A61Q19/00(2006.01)罗洪村柿子湾组(72)发明人肖启森(74)专利代理机构北京细软智谷知识产权代理有限责任公司11471代理人刘静培(51)Int.Cl.C07K2/00(2006.01)C07K1/14(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/36(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种羊胚胎素活性肽的提取方法(57)摘要本发明涉及一种羊胚胎素活性肽的提取方法，所述提取方法包括如下步骤：从藏山羊的母体内取出羊胚胎，冲净并消毒，在4℃以下无菌室中取出出羊胚胎的内脏、脐带和下颌下腺，进行匀浆4-6分钟，然后放入pH为2.5-3.5的盐水中，搅拌并提取3.5-4.5h，离心，收集上清液；加硫酸铵饱和放置过夜，收集沉淀，然后用4-6倍的盐水溶解所述沉淀，纳滤，浓缩，冻干，得到所述的羊胚胎素活性肽。本发明的提取方法工艺简单，产品收率高，得到的活性肽活性强，纯度高。CN111647039ACN111647039A权利要求书1/1页1.一种羊胚胎素活性肽的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括如下步骤：(1)从藏山羊的母体内取出羊胚胎，冲净并消毒，在无菌室中取出所述出羊胚胎的内脏、脐带和下颌下腺，进行低温匀浆4.5-5.5分钟，然后放入pH为2.5-3.5的盐水中，搅拌并提取3.5-4.5h，离心，收集上清液；(2)将步骤(1)得到的所述上清液加硫酸铵饱和放置过夜，收集沉淀，然后用4-6倍的盐水溶解所述沉淀，纳滤，冻干，得到所述的羊胚胎素活性肽。2.根据权利要求1所述的羊胚胎素活性肽的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，所述臧山羊为生活在海拔3000米以上，怀孕10周以上的藏山羊。3.根据权利要求1所述的羊胚胎素活性肽的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，采用75％的酒精进行消毒。4.根据权利要求3所述的羊胚胎素活性肽的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，采用冰醋酸调节盐水的pH。5.根据权利要求1或4所述的羊胚胎素活性肽的提取方法，其特征在于，步骤(1)中和步骤(2)中，所述盐水均为NaCl溶液，所述盐水的浓度为0.04-0.06mol/L。6.根据权利要求5所述的羊胚胎素活性肽的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，放入10倍的pH为3.0，浓度为0.05mol/L的盐水中。7.根据权利要求1所述的羊胚胎素活性肽的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，所述匀浆的温度为10℃以下。8.根据权利要求7所述的羊胚胎素活性肽的提取方法，其特征在于，在4℃以下的无菌室中取出所述出羊胚胎的内脏、脐带和下颌下腺，将所述内脏、脐带和下颌下腺冷却至0℃，然后在0-4℃下匀浆5分钟。9.根据权利要求1或7所述的羊胚胎素活性肽的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，所述匀浆的转速11500-12500rpm，匀浆时间为5min。10.根据权利要求1所述的羊胚胎素活性肽的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，所述纳滤用于截留分子量为100-10000Da的活性物质，形成羊胚胎素原液。2CN111647039A说明书1/3页一种羊胚胎素活性肽的提取方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，涉及一种羊胚胎活性物质的提取，具体涉及一种羊胚胎素活性肽的提取方法。背景技术[0002]自1912年，瑞士科学家卡尔教授首次发现羊胚胎细胞中有一种能使细胞恢复活力的物质(称之为羊胚胎素)以来。全世界各地科研人员都在研究羊胚胎素的成份和作用，取得伟大的成绩。我国基本都处于在实验阶段，工艺繁琐，不便于规模生产，收率较低，得到的活性肽的活性不高且易失活。[0003]鉴于以上原因，特提出本发明。发明内容[0004]为了解决现有技术存在的以上问题，本发明提供了羊胚胎素活性肽的提取方法，本发明的提取方法工艺简单，产品收率高，得到的活性肽活性强，纯度高。[0005]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：[0006]一种羊胚胎素活性肽的提取方法，所述提取方法包括如下步骤：[0007](1)从藏山羊的母体内取出羊胚胎，冲净并消毒，在无菌室中取出所述出羊胚胎的内脏、脐带和下颌下腺，进行低温匀浆4.5-5.5分钟，然后放入pH为2.5-3.5的盐水中，搅拌并提取3.5-4.5h，离心，收集上清液；[0